同时分离夏佛塔苷、维采宁-2和蜕皮激素的方法包括取干燥后粉碎的漆姑草约5kg,用90%(V/V)的乙醇采用浸渍法提取三次,每天一次,收集并合并提取液、减压浓缩至无醇味、稍粘稠状为止,浓缩液加少量水分散后依次用石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取5~6次,收集并合并正丁醇部位萃取液、减压浓缩得浸膏约270g。
所述正丁醇萃取部位浸膏分2次上AB-8大孔树脂,样品和AB-8大孔树脂的比例约为1:5(左右可以浮动),样品用热水溶解后上AB-8大孔树脂树脂柱,采用纯水、30%、50%、70%的乙醇溶液依次进行洗脱,经TLC检测发现所需分离的目标成分(夏佛塔苷、维采宁-2和蜕皮激素)主要集中于50%的乙醇洗脱部分,收集50%的乙醇洗脱部分并减压浓缩得浸膏。
上述所得50%乙醇洗脱部分的浸膏用洗脱剂溶解后湿法上ODS反相层析柱,样品和ODS填料的比例约为1:80(左右可以浮动),以甲醇:水=1:1.5为洗脱溶剂进行洗脱(洗脱剂的比例可在此基础上根据TLC具体情况进行调节),TLC检测并合并相同组分直至目标成分全部流出,得化合物A(蜕皮激素)、含杂质的化合物B(维采宁-2)和含杂质的化合物C(夏佛塔苷)。
含杂质的化合物B(维采宁-2)和含杂质的化合物C(夏佛塔苷)分别进一步上硅胶柱分离纯化,以乙酸乙酯-甲醇-水为洗脱系统,其比例为乙酸乙酯:甲醇:水≈8:1:1(可在此基础上根据TLC具体情况进行调节),TLC检测并合并相同组分直至目标成分全部流出,得化合物B(维采宁-2)和化合物C(夏佛塔苷)。