液相色谱

液相色谱是目前物质组分微量分析的重要方法之一。色谱分析中两相是指具有大比表面积的固定相和携带有待分离的混合物流过固定相的流动相。用液体作流动相的称液相色谱。
液相色谱又称“液相层析”。一种色层分析方法,所用流动相为液体。由于层析柱内液体比气体受的阻力大,故为了提高分析速度,通常采用高压输液方式,所以又称为“高压液相色谱”。根据固定相的不同可分为液—固色谱和液—液色谱;根据固定相与流动相所发生平衡的类型不同,可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱等。用于有机物,无机物和高分子液体的分离及分析。
【简史】
俄国植物学家茨维特(M.S.Tswett)于1906年首次使用柱层析进行了植物色素的分离,是液相色谱法中最古老的一种,近30年来发展成各种各样的色谱分离法,并成为分析化学的一个重要部分。①经典液相色谱法:流动相由柱管上端靠自身重力向下流动,在柱下部出口处逐份收集流出液,再用其他方法进行测定,分析速度慢、效率低;②薄层色谱法:出现于40年代前后,操作方便,分析速度上有了改进,但重复性差、定量困难;③高效液相色谱法:60年代初吉迪丁斯(J.C.Gidelings)将气相色谱理论经修正后用于液相色谱,为其现代化奠定了基础。此后在技术上采用了高压泵,高效固定相和高灵敏度检测器,发展为分析速度快、分离效率高和操作自动化的高效液相色谱。1971年亨利(R.A.Henry)等首先把它用于农药分析。
【高效液相色谱法】
高效液相色谱法是现代分析化学中最重要的分离方法之一。它起源于经典的液相色谱法,其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相,用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱,注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后,各成分先后进入检测器,用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理,得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相,本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定,特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有:硅胶,用于正相色谱;化学键合固定相,根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱;离子交换填料,用于离子交换色谱;具一定孔径的大孔填料,用于排阻色谱。
高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外、可见光检测器,其他检测器如示差折光检测器、蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱,可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。
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