弗氏完全佐剂

免疫佐剂是一类本身没有抗原性，但与抗原一同注入动物体内能通过延缓抗原排除而增强免疫效果的制剂。最常用的免疫佐剂是弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂。前者是将抗原与矿物油、乳化剂(如羊毛脂)混匀形成油包水乳剂，使抗原进入动物组织后能缓慢释出；在弗氏不完全佐剂中加入卡介苗等细菌制剂可以刺激动物的免疫系统，非特异性地提高免疫应答水平，称为弗氏佐剂。
弗氏完全佐剂是用矿物油(石腊油)、乳化剂(如羊毛脂)和灭活的结核杆菌制成的油色冰型乳化剂。在实验免疫学中，可用本品促进弱抗原物质抗体的生成。在药理学中，可用它制造动物关节炎模型(佐剂性关节炎)。该佐剂是由美籍匈牙利细菌学家JulesThomas Freund(1891—1960)发明的，故以其名子命名。因该佐剂中含分枝杆菌，故又称为分枝杆菌佐剂。不含分枝杆菌者为弗氏不完全佐剂。弗氏佐剂是一种同抗原一起或预先注入机体，能增强免疫原性，或改变免疫反应类型的物质。佐剂的种类很多，有氢氧化铝、甲基纤维素、百日咳菌苗等，以弗氏佐剂最为常用，弗氏佐剂分为不完全佐剂及完全佐剂两种。完全佐剂的免疫原性强，易在注射部位形成肉芽肿和持久性溃疡，造成较严重的组织损伤，因而主要用于动物实验，不运用于人体。免疫佐剂是指与抗原混合后注入动物体内，能增强抗原性和机体免疫应答的一类物质。免疫佐剂的作用：
①能使弱抗原物质增强抗原性；
②增加特异性循环抗体水平，或产生有效的保护性免疫；
③改变所产生的循环抗体类型；
④增强细胞介导的超敏反应能力；
⑤保护抗原(特别是DNA、RNA)不受体内酶的分解。
佐剂对某些分子量小的多糖或多肽抗原性微弱的物质，尤能增强其产生特异性反应的作用。弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：
（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全，个别抗原，用塑料注射器根本推不动，而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水剂。
（3）超声：实验室条件好点的，比如说有超声破碎仪的，一定要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。1、弗氏佐剂可用于制备免疫原的油包水乳液。由于抗原释放缓慢，油包水乳液中的抗原可刺激高效长期的抗体应答。
2、弗氏完全佐剂中的分枝杆菌可将巨噬细胞和其他细胞吸引到注射部位，从而增强免疫应答。鉴于此原因，将弗氏完全佐剂用于初始注射，而将弗氏不完全佐剂用于随后的加强注射。
3、Sigma公司的弗氏完全佐剂规格：产品编号：F5881；每毫升含1mg热灭活的干燥结核分枝杆菌 (H37Ra, ATCC 25177)、0.85mL石蜡油和0.15mL二缩甘露醇一油酸。
有关弗氏完全佐剂的信息由Chemicalbook的彤彤编辑整理（2015-09-21）。