冬凌草提取物
冬凌草提取物 性质
冬凌草提取物为唇形科植物碎米桠Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara的干燥全草提取物。
冬凌草的学名为碎米桠，是现代兴起的药食兼用野生植物。其全草入药。冬凌草性味苦、甘，微寒。有清热解毒，消炎止痛，健脾活血，清咽利喉等功用，对多种癌症有显著疗效。临床应用证明，此草对食管癌、贲门癌、肝癌、膀胱癌及其它恶性肿瘤均有一定疗效。20世纪90年代，以冬凌草鲜叶、花等为原料开发的保健茶、速溶茶、可乐、咖啡等一系列保健饮品均已先后问世。这些产品不但具有一定保健功用，而且还有较高的营养价值。如保健茶具有保嗓健喉、防癌等功用；含有17 种氨基酸、24 种微量元素及维生素等营养成分。冬凌草的保健功用在国外也很受重视，如在美国市场上已有以膳食补充剂名义进行销售的冻凌草制剂。在日本市场上已有冬凌草茶等保健饮品。
图1为冬凌草冬凌草含有单萜、倍半萜、二萜、三萜等一系列萜类化合物。贝壳杉烯类二萜是冬凌草中主要化学成分，其中冬凌草甲素、乙素为该植物的抗癌有效成分。
1.冬凌草甲素(Oridonin)：异名冬凌草素、延命草宁。分子式C20H28O6，分子量364.42。无色棱柱状结晶、味苦，mp.248℃～250℃(分解)，[α]D17-46°(C=1.0，吡啶)。
2.冬凌草乙素(Rubescensine B)：异名Ponicidin。分子式C20H26O6，分子量362.17。无色针状结晶(甲醇)，mp.238℃～241℃，[α]D23-107°(C=0.12，吡啶)。
3.其他成分：从不同产地的冬凌草中还相继分出了多种贝壳杉烯类二萜，如从济源冬凌草中分出冬凌草丙素(RubescensinC)、冬凌草丁素、戊素；从河南鹤壁产冬凌草中分得冬凌草辛素；从河南鲁山冬凌草中分离出鲁山冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素(LushanrubescensinA、B、C、D)；从河南卢氏冬凌草中分出卢氏冬凌草甲素、乙素及卢氏冬凌草素；从贵州冬凌草中分出贵州冬凌草素(Guidongnin)。
图2为结构式冬凌草中齐墩果酸的提取分离
冬凌草叶→提取器中，10倍量95%乙醇，破碎提取2min→匀浆状提取物→抽滤→滤液→真空浓缩→浸膏→适量无水乙醇溶液→乙醇液→2%活性炭 ，回流脱色→脱色液→抽滤去活性炭→滤液→连续减压浓缩至一定量一定量→浓缩液→适量层析用硅胶吸附，拌匀，蒸干，研碎成粉装柱，乙酸乙酯-石油醚洗脱，流速10-15ml/min→流份（每份200ml）→第25-42流份经TLC检识成分相同，合并→合并流份→回收溶剂→齐墩果酸
图3为乙醇提取法1.抗癌作用
冬凌草的水或醇提取物对体外培养的Hela 细胞和食管癌细胞均有一定的细胞毒作用，也能抑制各种动物肿瘤的生长。冬凌草素对人体食管鳞癌细胞株CaEs-17有明显细胞毒作用，对人肝癌BEI-7402细胞有一定杀伤作用。
2.对血流动力学的影响
冬凌草甲素3.0、10.0mg/kg静脉注射能使麻醉家兔心脏的左心室收缩压、左心室内压最大变化率、心肌收缩成分缩短速率峰值、左心室内压-压力变化速率环环体面积等均缩小，左心室内压开始上升至上升速率峰值时间延长，心率减慢，即负性肌力、负性频率作用。此外冬凌草甲素还具有明显的降压作用，其特点是主动脉舒张压下降幅度大于主动脉收缩压，推测冬凌草甲素可能具有扩张血管作用。
3.抗菌作用
冬凌草醇剂对金黄色葡萄球菌及甲型溶血性链球菌有明显抗菌作用，对上述细菌的MIC分别为1：28及1：256，去鞣酸不影响其抗菌作用；冬凌草煎剂亦有一定抗菌作用，但较弱;冬凌草总二萜的抗菌作用强度大为提高;冬凌草挥发油亦有一定抗菌作用，但较弱; 冬凌草黄酮则无抗菌作用。
4.其他作用
冬凌草水及醇提取物对兔食管平滑肌之张力有轻度抑制作用，对乙酰胆碱所引起的食管痉挛有解痉作用；但对食物的蠕动则无影响。冬凌草煎剂及醇剂均可抑制实验性大鼠肉芽肿的形成，但不影响大鼠肾上腺中维生素C的含量。小鼠热板法试验证明，冬凌草醇提取物略可提高动物对刺激的痛阈，并可增强小剂量杜冷丁提高痛阈的作用。上述作用可以说明冬凌草对肿瘤病人症状缓解有疗效。叶表面观
上表皮细胞垂周壁波状弯曲;腺鳞和腺毛较多，腺鳞头部扁球形，由4个细胞组成，柄短，单细胞；腺毛头部由1～2个细胞组成，直径16～24μm，柄单细胞;非腺毛少数1～3个细胞组成，类圆锥形，长32～120μm，基部直径32μm；叶缘及脉上有较多2个细胞组成的非腺毛，呈弯钩状。下表面与上表面相似，但有直轴式气孔。
茎横切面
表皮细胞类方形，小，切向宽5～8μm;非腺毛很多，直立或斜折状，由1～3细胞组成，长24～100μm，基部直径12～28μm，表面壁上疣状突起明显;腺毛头部直径16～20μm，柄单细胞。四棱处有5～6列厚角细胞，皮层细胞4～6列，略切向延长，近中柱鞘的薄壁细胞大，类方形。韧皮纤维单个散在，其外纤维束断续排列成环；木质部窄。髓大，细胞多角形，无内含物。表面观表皮细胞多角形或长方形。
薄层层析
取茎叶粉末(60目)1g，用乙醚20mL冷浸4小时，浓缩后点样。吸附剂为硅胶G铺板，105℃活化1小时。展开剂为己烷-丙酮(6∶4)。展距11cm。显色剂：碘蒸气显色，斑点呈黄色。清热解毒，消炎止痛，健胃活血，抗肿瘤。用于支气管炎，扁桃体炎，咽炎，盆腔炎，食道癌，肝癌等。冬凌草给小鼠腹腔注射的LD50为(55.8±5.7)mg/kg。大鼠腹腔每日注射 5～10mg/kg，连续用药10天，对动物肝、肾功能及外周血象均无明显影响。冬凌草乙素给小鼠腹注的LD50为(45.1±6.7) mg/kg，大鼠腹腔每日注射20mg/kg，连用10天，对肝、肾、骨髓亦无明显影响。临床用冬凌草治疗肿瘤一般无副作用。少数人服药后有轻度腹胀、腹疼、肠鸣、溏泻，偶有恶心，未发现对血象及肝、肾功能损害。
冬凌草的学名为碎米桠，是现代兴起的药食兼用野生植物。其全草入药。冬凌草性味苦、甘，微寒。有清热解毒，消炎止痛，健脾活血，清咽利喉等功用，对多种癌症有显著疗效。临床应用证明，此草对食管癌、贲门癌、肝癌、膀胱癌及其它恶性肿瘤均有一定疗效。20世纪90年代，以冬凌草鲜叶、花等为原料开发的保健茶、速溶茶、可乐、咖啡等一系列保健饮品均已先后问世。这些产品不但具有一定保健功用，而且还有较高的营养价值。如保健茶具有保嗓健喉、防癌等功用；含有17 种氨基酸、24 种微量元素及维生素等营养成分。冬凌草的保健功用在国外也很受重视，如在美国市场上已有以膳食补充剂名义进行销售的冻凌草制剂。在日本市场上已有冬凌草茶等保健饮品。
图1为冬凌草冬凌草含有单萜、倍半萜、二萜、三萜等一系列萜类化合物。贝壳杉烯类二萜是冬凌草中主要化学成分，其中冬凌草甲素、乙素为该植物的抗癌有效成分。
1.冬凌草甲素(Oridonin)：异名冬凌草素、延命草宁。分子式C20H28O6，分子量364.42。无色棱柱状结晶、味苦，mp.248℃～250℃(分解)，[α]D17-46°(C=1.0，吡啶)。
2.冬凌草乙素(Rubescensine B)：异名Ponicidin。分子式C20H26O6，分子量362.17。无色针状结晶(甲醇)，mp.238℃～241℃，[α]D23-107°(C=0.12，吡啶)。
3.其他成分：从不同产地的冬凌草中还相继分出了多种贝壳杉烯类二萜，如从济源冬凌草中分出冬凌草丙素(RubescensinC)、冬凌草丁素、戊素；从河南鹤壁产冬凌草中分得冬凌草辛素；从河南鲁山冬凌草中分离出鲁山冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素(LushanrubescensinA、B、C、D)；从河南卢氏冬凌草中分出卢氏冬凌草甲素、乙素及卢氏冬凌草素；从贵州冬凌草中分出贵州冬凌草素(Guidongnin)。
图2为结构式冬凌草中齐墩果酸的提取分离
冬凌草叶→提取器中，10倍量95%乙醇，破碎提取2min→匀浆状提取物→抽滤→滤液→真空浓缩→浸膏→适量无水乙醇溶液→乙醇液→2%活性炭 ，回流脱色→脱色液→抽滤去活性炭→滤液→连续减压浓缩至一定量一定量→浓缩液→适量层析用硅胶吸附，拌匀，蒸干，研碎成粉装柱，乙酸乙酯-石油醚洗脱，流速10-15ml/min→流份（每份200ml）→第25-42流份经TLC检识成分相同，合并→合并流份→回收溶剂→齐墩果酸
图3为乙醇提取法1.抗癌作用
冬凌草的水或醇提取物对体外培养的Hela 细胞和食管癌细胞均有一定的细胞毒作用，也能抑制各种动物肿瘤的生长。冬凌草素对人体食管鳞癌细胞株CaEs-17有明显细胞毒作用，对人肝癌BEI-7402细胞有一定杀伤作用。
2.对血流动力学的影响
冬凌草甲素3.0、10.0mg/kg静脉注射能使麻醉家兔心脏的左心室收缩压、左心室内压最大变化率、心肌收缩成分缩短速率峰值、左心室内压-压力变化速率环环体面积等均缩小，左心室内压开始上升至上升速率峰值时间延长，心率减慢，即负性肌力、负性频率作用。此外冬凌草甲素还具有明显的降压作用，其特点是主动脉舒张压下降幅度大于主动脉收缩压，推测冬凌草甲素可能具有扩张血管作用。
3.抗菌作用
冬凌草醇剂对金黄色葡萄球菌及甲型溶血性链球菌有明显抗菌作用，对上述细菌的MIC分别为1：28及1：256，去鞣酸不影响其抗菌作用；冬凌草煎剂亦有一定抗菌作用，但较弱;冬凌草总二萜的抗菌作用强度大为提高;冬凌草挥发油亦有一定抗菌作用，但较弱; 冬凌草黄酮则无抗菌作用。
4.其他作用
冬凌草水及醇提取物对兔食管平滑肌之张力有轻度抑制作用，对乙酰胆碱所引起的食管痉挛有解痉作用；但对食物的蠕动则无影响。冬凌草煎剂及醇剂均可抑制实验性大鼠肉芽肿的形成，但不影响大鼠肾上腺中维生素C的含量。小鼠热板法试验证明，冬凌草醇提取物略可提高动物对刺激的痛阈，并可增强小剂量杜冷丁提高痛阈的作用。上述作用可以说明冬凌草对肿瘤病人症状缓解有疗效。叶表面观
上表皮细胞垂周壁波状弯曲;腺鳞和腺毛较多，腺鳞头部扁球形，由4个细胞组成，柄短，单细胞；腺毛头部由1～2个细胞组成，直径16～24μm，柄单细胞;非腺毛少数1～3个细胞组成，类圆锥形，长32～120μm，基部直径32μm；叶缘及脉上有较多2个细胞组成的非腺毛，呈弯钩状。下表面与上表面相似，但有直轴式气孔。
茎横切面
表皮细胞类方形，小，切向宽5～8μm;非腺毛很多，直立或斜折状，由1～3细胞组成，长24～100μm，基部直径12～28μm，表面壁上疣状突起明显;腺毛头部直径16～20μm，柄单细胞。四棱处有5～6列厚角细胞，皮层细胞4～6列，略切向延长，近中柱鞘的薄壁细胞大，类方形。韧皮纤维单个散在，其外纤维束断续排列成环；木质部窄。髓大，细胞多角形，无内含物。表面观表皮细胞多角形或长方形。
薄层层析
取茎叶粉末(60目)1g，用乙醚20mL冷浸4小时，浓缩后点样。吸附剂为硅胶G铺板，105℃活化1小时。展开剂为己烷-丙酮(6∶4)。展距11cm。显色剂：碘蒸气显色，斑点呈黄色。清热解毒，消炎止痛，健胃活血，抗肿瘤。用于支气管炎，扁桃体炎，咽炎，盆腔炎，食道癌，肝癌等。冬凌草给小鼠腹腔注射的LD50为(55.8±5.7)mg/kg。大鼠腹腔每日注射 5～10mg/kg，连续用药10天，对动物肝、肾功能及外周血象均无明显影响。冬凌草乙素给小鼠腹注的LD50为(45.1±6.7) mg/kg，大鼠腹腔每日注射20mg/kg，连用10天，对肝、肾、骨髓亦无明显影响。临床用冬凌草治疗肿瘤一般无副作用。少数人服药后有轻度腹胀、腹疼、肠鸣、溏泻，偶有恶心，未发现对血象及肝、肾功能损害。