3-磷酸甘油醛脱氢酶

CN201711376257.7提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶及其多克隆抗体。得到了 来源于细菌中的3-磷酸甘油醛脱氢酶，而且该3-磷酸甘油醛脱氢酶具有低温酶的特性，制 备得到3-磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体，能够准确检测3-磷酸甘油醛脱氢酶。本发明的目的之一是提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶的氨基酸序列；所述3-磷酸甘 油醛脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的目的之二是提供一种编码3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的碱基序列；所述3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的目的之三是提供一种3-磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体制备方法。包括以下步骤：
1)以氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的3-磷酸甘油醛脱氢酶为抗原，免疫小鼠制备抗血清；
2)纯化抗血清得到3-磷酸甘油醛脱氢酶的多克隆抗体。进一步地，所述3-磷酸甘油醛脱氢酶的制备方法为：1.1)利用PCR技术扩增SEQ ID NO.2所示的碱基序列；1.2)将SEQ ID NO.2所示的碱基序列克隆入载体质粒中，构建3-磷酸甘油醛脱氢 酶的表达载体；1.3)将表达载体转化入大肠杆菌感受态菌体中得到重组菌体，依次经扩大培养、诱导表达、收集菌体、破碎菌体和纯化蛋白过程得到3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白。图3为重组菌株Ecoli BL21-pET21a-GPR表达3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白的聚丙烯 酰胺凝胶电泳鉴定图；其中M泳道为protein marker；1号泳道为3-磷酸甘油醛脱氢酶蛋白；
3-磷酸甘油醛脱氢酶，它可以催化3-磷酸甘油醛氧化(脱氢)和磷酸化，生成1，3-二磷酸甘油酸，是糖代谢的中心环节，故对糖代谢起着重要的作用。3-磷酸甘油醛脱氢酶广布于人体各组织器官，脂肪组织含量较低，肺含酶量约为脂肪组织的10倍，肝、心含量相近，约为脂肪组织的30倍，以骨骼肌、红细胞和肾中的含量最为丰富。急性肝炎、酒精性肝病、肝硬变等可致血清GAPD总活性升高。慢性肾盂肾炎、多发性骨髓病、肺炎、肺气肿等病人血清 GAPDA活性呈不同程度的升高。3-磷酸甘油醛脱氢酶的应用前景十分广阔，它是糖代谢的中心环节，对糖代谢起着重要的作用，而对于体内缺乏此酶，糖代谢有问题的病人，通过食用含有此酶的药物，可以使病情得以缓解，治疗。该酶还分布于人体各组织器官故通过对3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性检测就可以推断是否患有此类病，对于疾病的预防有着很大作用。白色结晶状物质，悬浮于3.2mol/L硫酸铵溶液(含0.1mmol/L EDTA)中。稳定性：5℃条件下，悬浮液可保存数月活力不变；定时更换新介质可长期保持活性不变；结冻或解冻能使其失活。每分子甘油醛-3-磷酸脱氢酶含3.8-4.0高活性的半胱氨酸残基，并能与4分子的辅酶I (NAD+)或还原辅酶I (NADH)结合，酶反应：D-甘油醛-3-磷酸+辅酶I+无机磷═1，3-二磷酸-D-甘油酸+还原辅酶I。用于测定ATP甘油-3-磷酸偶联反应的生化研究，临床上常用作诊断酶，直接测定磷酸甘油酸激酶的活力。常用诊断用酶。测定ATP甘油醛-3磷酸偶联反应的生化研究，并可直接用于测定磷酸甘油酸激酶的活力。以免肌为原料，经KOH提取、硫酸铵分级分离，再经Sephadex G-50柱层析和CM-Sephadex柱层析，最后硫酸铵沉淀、重结晶而得。