中文名:溴化氰活化的琼脂糖
英文名:CNBr-Activated Agarose
中文别名:Cyanogen bromide-activated Agarose
英文别名:Cyanogen bromide-activated Agarose
货号:C393372
包装:15g、1g、5g
Cas号:68987-32-6
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
氰化溴化物活化的琼脂糖是一种用乳糖稳定的冻干粉,可用于亲和层析、蛋白层析、蛋白相互作用、抗体标记、抗体修饰以及将抗体附着于琼脂糖珠上。
偶联方法
(1) 液配制
偶联液:0.2M NaHCO0.5M NaCl,pH8.0:
封闭液:0.1M Tris;pH8.5;
清洗液D:0.1MZ酸乙酸钠,0.5M NaCl,pH3.0;
清洗液2:0.1M Tris-HCL,0.5M NaClpH8.0。
必须尽量缩短清洗和偶联之间的时间间隔,因此建议在偶联前准备所有需要的溶液。缓冲液均需先过滤再使用。
(2)蛋白预处理
每毫升的介质可偶联10~12mg的蛋白。干粉状蛋白可用偶联液溶解蛋白,液体状蛋白需将其缓冲液置换为偶联液。
(3)清洗
取适量丙酮保存的凝胶放在玻璃过波漏斗过波掉丙酮回收,用纯水清洗4倍胶体积,再用4倍胶体积的偶联液洗涤。
(4)偶联
偶联比(凝胶:偶联样品液)=1:2(:V)洗涤完成后,快速将清洗后抽干的凝胶加到蛋白溶液中,揽匀,pH调到8.3,于室温振荡反应2h,转速70rpm。
(5)封闭
反应完成后收集偶联样品,可测偶联样品液中蛋白浓度(紫外吸收法),计算偶联率。收集的偶联样品用超纯水清洗两遍,封闭液清洗一遍,再加入2倍胶体积的封闭液,室温振荡到闭1h,以消除转余活性基团。
(6) 清洗
取封闭后的凝胶,用超纯水清洗3遍,清洗液D、清洗液(2重红清洗3遍,超纯水清洗3遍,蛋白偶联完成,该亲和介质可使用。
(7)保存
20%的乙醇,4°C保存。
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