Β-淀粉样多肽(1-42)性质、用途与生产工艺
β-淀粉样多肽-42(Amyloidβ-42, 简称Aβ42)是存在于阿尔茨海默病(Alzheimer′s Disease, AD)患者脑组织中的特异病理改变之物, 同时它在AD患者的脑积液及血浆中有所改变。
白色粉末，溶液外观：透明
图1为TUNEL 法测定细胞凋亡的荧光显微镜照片
图2为原子力显微镜观察 Aβ42 寡聚体和 Aβ42 形态比较
在溶液中，一定浓度的Aβ42从无规则卷曲逐渐转变为交叠的β-片层结构，最终形成成熟的纤维结构。在这个过程中，作为聚集过程的中间产物的低聚物，被认为是Aβ42的主要毒性形式。大致根据通过分子筛分离这些可溶低聚体物的孔度大小，以分子量进行分类，这些可溶的低聚物可被分为低分子量（MW）（2–8个单体）和高分子量（20–40个单体）两种。在低浓度条件下，Aβ42的二聚体是寡聚体中的最稳定结构。而圆二色谱的结果显示低分子量的寡聚体主要的二级结构形式是β折叠，这与高分子量的聚集体是不同的，说明它们比高分子量聚集形式更容易折叠成β-片层结构。研究发现能快速形成β-片层结构的低聚物最具细胞毒性。虽然表面带有大量的负电荷膜的Aβ在溶液中多以螺旋的二级结构存在，但Aβ42的单体由于表面的双分子膜的相互结合却导致了聚集过程中β-片层结构形成，目前仍尚不明确的是这些低聚体在什么阶段开始转变二级结构为形成原纤维和纤维结构提供内核的。正是这些可溶的低聚物导致了对大脑细胞的致死性损害，这类寡聚体对淀粉样纤维的生长和沉积都具有决定性。这些可溶性Aβ低聚物的存在与可逆的记忆丢失症状也相关联密切。而且可溶性Aβ低聚物诱导的细胞毒性可通过低聚物特异性抗体而得到抑制。
图3为Aβ42寡聚体和纤维结构的分子模型
1.抗人-Aβ42抗体的制备
选用三个月龄, 体重约为2kg 左右的新西兰白兔作为免疫动物 。 在对其进行基础免疫前采取正常对照血清备用, 随后进行基础免疫。 基础免疫原中的Aβ42多肽量为100μg , 并加入等体积的完全福氏佐剂进行充分乳化, 乳化后在兔子背部进行多点皮内注射。 之后每一个月加强免疫一次, 其免疫原中的Aβ42量为50μg,并与不完全福氏佐剂进行乳化,皮下注射。在每次加强免疫后的第10天,从兔耳静脉中采取血样,进行Aβ42抗体效价的追踪检测,直至四个月后获得较满意的抗人-Aβ42抗体。 最后将获得的抗体(抗血清)与甘油(1：1)混合, 置 -20℃中保存。
2.Aβ42寡聚体的制备
（1）将Aβ42备体从-80度箱取出放在冰上.
（2）在通备六丙醇橱内将氟异(HFIP)放在上备冷冰,每5mgAβ体加入1.1mL HFIP,步在冰 上行.
（3）盖上心管离盖在室温放置60min使Aβ充分溶解.
（4）溶解好的将Aβ放回上冰5-10min,分装每管100微升.
（5）室温在通备打备盖子使橱内HFIP备备,备2h备备完.
（6）在超备台中每管加20微升新打的DMSO,吹打混后匀, 每管加1毫升F12培基.
（7）4度放置24h后分装,放入-80度冰箱保存.
Aβ42的端氨基酸序列(约1-15个氨基酸)为抗原产生的抗体产生体液免疫应答。能够与Aβ特异性的结合。Aβ42 C端的氨基酸序列被认为含有T细胞抗原表位，可以起自体性的细胞免疫应答，是临床实验产生无菌性脑炎的主要原因。
图4为Aβ42的抗原表位示意图
[1]徐宝钢. β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(42))多克隆抗体的制备及其鉴定[J]. 放射免疫学杂志,2003,(06):322-325.
[2]崔理立. 针对阿尔茨海默病中Aβ42靶点的天然药物及其分子机制的研究[D].吉林大学,2012.
[3]http://www.doc88.com/p-396245716943.html.
[4]王建秀,王德生,段淑荣,赵敬堃,王景贺. Aβ 42与Aβ 42寡聚体的生物学性质比较研究[J]. 中国现代医学杂志,2009,19(17):2577-2580+2584.
Β-淀粉样多肽(1-42)
上下游产品信息
上游原料
下游产品