慢病毒包装试剂盒

慢病毒包装试剂盒性质、用途与生产工艺

简介

慢病毒包装试剂盒包括优化的慢病毒包装辅助质粒混合物（GM easyTM Lentiviral Mix）、表达eGFP蛋白的对照质粒和高效转染试剂（HG TransgeneTM Reagent），可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装质粒，其优势在于慢病毒包装时间周期短（一周之内即可拿到纯化好的高滴度慢病毒）、病毒，可应用于针对不同基因和药物靶标的临床前细胞学实验和整体动物实验。

实验原理

慢病毒载体表达系统由pGMLV慢病毒载体和Lentiviral Mix质粒组成。pGMLV慢载体中含有HIV的基本元件5’LTR和3’LTR以及其他辅助元件，例如WPRE和cPPT/CTS等。翌圣可以根据不同的实验目的针对pGMLV载体改造以进行启动子活性研究、基因表达研究、RNA干扰等研究。Lentiviral Mix能够表达病毒包装需要的各种必需成分如：gag基因，编码病毒主要的结构蛋白；pol基因，编码病毒特异性的酶；rev基因，编码调节gag和pol基因表达的调节因子；还含有单纯疱疹病毒来源的VSV-G基因，提供病毒包装所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第三代的慢病毒包装质粒。

实验操作

1)293T细胞分盘：转染前一天，将已经长好的细胞以合适比例传代到10 cm培养皿中，当细胞长到~80%时准备转染。

2)转染前换液：转染前1~2 h将需要转染的细胞换新鲜的培养基，12 mL/10 cm皿。注意：293T细胞贴壁性不是很好，换液时应小心滴加尽量避免冲起细胞。

3)转染：取无菌的1.5 mL EP管或15 mL离心管，MIX混匀后，室温放置18 min~20 min后，均匀滴加到提前换过液的培养皿中，后置于CO2培养箱中培养。

4)换液：转染18~20 h后，小心吸掉细胞培养液弃于盛有消毒液的废液杯中（注意：此时培养基中已含有少量的病毒，必须经处理后才能丢弃，所用的移液枪头等必须经消毒液浸泡处理后才能丢弃），然后加15 mL新鲜的培养基（也可根据实验要求换为无血清的DMEM）继续培养。

5)病毒收集：换液48 h后，吸取细胞上清液于50 mL离心管，4℃，500 g离心5 min，上清液用0.45μm滤器过滤后转移到新的离心管中。此时上清液中的病毒颗粒可以直接去检测滴度或者感染目的细胞，如果对病毒的滴度及纯度有较高要求，可对上清液进行浓缩与纯化。

6)病毒分装与保存：将病毒以40~50μL分装，后保存于-80℃。

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