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双链酶

双链酶, 8048-16-6, 结构式
双链酶
CAS号:
8048-16-6
英文名:
Streptodornase/streptokinase
英文别名:
SK-SD;Varidase;Dornokinase;Varidase (Lederle);Mixture with streptokinase;strptokinase-strrptodornase;Streptodornase/streptokinase;streptokinase/ streptodornase;Streptodornase/streptokinase USP/EP/BP
中文名:
双链酶
中文别名:
双链酶
CBNumber:
CB81486326
分子式:
分子量:
0
MOL File:
Mol file

双链酶化学性质

安全信息

双链酶性质、用途与生产工艺

化学性质 

双链酶系从β溶血性链球菌培养液中经提取、分离而制得的混合酶制剂,为白色、类白色结晶性或无定形粉末。易溶于水。但水溶液室温下迅速失活,2~100C可稳定7天,在中性介质中有最大的活性。粉末40C以下可维持活性达18个月。链激酶能溶解血栓和渗出物的纤维部分,去氧核糖核酸能液压死细胞的黏稠性核蛋白。两种酶合用可促使外伤或炎症后血块及纤维或化脓性堆积物的清除。

用途 

双链酶可作为辅助药物用于治疗脓胸、血胸、血肿、引流窦的慢性化脓、骨髓炎、溃疡和感染性创伤。亦用于眼前房出血及玻璃体积血。但是,腔内注射可引起发热和出血。发热可用糖皮质激至少治疗。出血用6-氨基已酸有效。本品办是一种辅助治疗药物。只能在抗菌治疗和外科清创、引流等基础上应用。本品禁用于急性化脓性峰窝组织炎、活动性肺结核及支气管胸膜瘘病人,以免病灶扩散。低纤维酶原、低纤维蛋白原及肝功能、血象异常者亦均禁用。
本品可于患部腔内注射,或局部外用。腔内注射,对血胸和脓胸,可用10万单位SK和5万单位SD溶于10ml以上生理盐水注入。对上颌窦积脓,可注射1万~1.5万单位的SK和5000~7500单位SD(溶于2~3ml生理盐水中)。口含,每日4次,每次1 片,连用4~6日,滴用,用1000单位/ml溶液局部滴入,`1~2h1次,局部注射,眼内球后或结膜下注射、病灶周围注射,浓度为1000~2000单位/ml。

生产方法 

菌种培养 将β溶血性链球菌接种于含2%羊血清的牛肉汤菌种培养基5ml中,调节pH7.1~7.2,370C培养8h左右。待菌种培养基呈浑浊状时(否则应延长培养时间),将菌株移植于琼脂平板上,培养16 ~18h,即为生产用菌株。可保存40C冰箱中,可使用1个月之久。
菌种牛肉汤培养基;370;17h菌种培养平板菌落
一至三级种子培养将平板菌落接种子5ml种子培养基中,在370C下,培养5~8h即可。接三级种子时,在10L的种子罐中培养,种子量为2%~3%,370C培养10~13h即可得三级种子培养液。
平板菌落培养基;370;6h^→{一级种子培养液一级种子培养液培养基;370;6h^→二级种子培养
二级种子培养液培养基;370;11h^→三级种子培养三级种子培养液
发酵培养取发酵培养基150L,接种量为5%~10%,在罐压19.62kPa(在0.2kg)下,培养温度降至330左右,每隔半小时用碳酸钠(3mol/L)调节pH,使酸度维持pH7.3~7.4之间,发酵培养12h左右,进行取样,测链激激酶活性单位,直到链激酶活性达高峰时终止发酵,周期约14~16h,收率为链激酶519U/ml,脱氧核糖核酸酶1677U/ml.
三级种子培养液培养基发酵液
吸附、洗脱发酵液用氢氧化钠溶液(100g/L即10%)调节pH7.5~8,随后在每100ml发酵液缓缓加入胆固醇乙醇溶液(5%)1ml,充分搅拌5min。再在每100ml发酵液加入已通过80目以上的724树脂,待泡沫消失后,用乙酸溶液(10%)调节pH4.8~5.不断搅拌使之吸附30min,静置15min弃去上清液,树脂用pH4.8~5的自来水清洗 2次,pH4.8~5蒸馏水清洗 1次,洗净后过滤抽干,移入容器中,加入少量冰蒸馏水,以能搅拌为宜。在15^0C以下,边搅拌边滴加氢氧化钠(100g/L即10%)直至PH达到7.2为止。布氏漏斗过滤,并以少量蒸馏水冲洗树脂1次,合并滤液和洗液,得洗脱液。
发酵液胆固醇乙醇液;724树脂吸附吸附物H2OnaOH;pH7洗脱洗脱液
盐析每千克洗脱液加入243g的硫酸酸铵,使硫酸铵的饱和度达到40%,随时用氢氧化钠(100g/L)调节ph7~7.2,在100C左右待硫酸铵全部溶解,离心得[Ⅰ]沉淀物,供制备链激酶用;[Ⅱ]母液,供制备脱氧核核糖核酸酶,再分别进行处理。
洗脱液(NH4)2SO4;100C盐析→[Ⅰ]沉淀(供制链激酶用)→母液[Ⅱ](供制脱氧核糖核酸酶用)沉淀物——制备链激酶
磷酸钙处理、沉淀将沉淀物捣碎,加入一定量的蒸馏水并调节pH7.2,使其溶解。溶解后用氢氧化钠(100g/L)调节pH8~9,在充分搅拌下,每100ml溶液加入磷酸钠(152g/L即15.2%)10~17ml(体积为溶液的1/10~1/6),再加入乙酸钙(226g/L即22.6%)5~8ml,离心,收集澄清液,用盐酸(10%)调节pH7.2,即得酶溶液。将酶液置于00C右左的盐冰浴中,每100ml酶液中缓缓加入30ml冰甲醇,此时温度应低于80C,再用盐酸(10%)调节pH至5.2~5.4,静置15~30min。离心,收集沉淀,得酶的精制品。
[Ⅰ]沉淀H2O;Na3PO4;Ca(Ac)2磷酸钙处理酶溶液甲醇;pH5.3沉淀粗制品沉淀
等电点处理、沉淀将粗制品加适量馏水并调节pH至7.2。,使之完全溶解。置冰溶中用盐酸(1mol/L)调节ph至5,进行沉淀,收集沉淀,再加入与原液等体积的、pH7.2的蒸馏水中,置冰浴中降温到00C, 在小于50C条件下,在每100ml冰溶液中,逐渐加入冰甲醇30ml,用盐酸(1mol/L)调节ph为5.4~5.5,静置15~30min,离心,得沉淀物。
粗制品沉淀蒸馏水;pH7.2→酶粗制液甲醇;pH5.4沉淀沉淀物
预吸附、等电点处理将沉淀溶于pH6.6的蒸馏水中,使酶液浓度给50~100万单位/ml,加入等量的pH6.6磷酸缓冲液(0.2mol/L),然后在每3亿单位/ml的酶液浓度加入已用ph6.6磷酸冲液平衡过的DEAE-纤维素200g,充分搅拌15min右左,过滤,DEAE-纤维用pH6.6 磷酸缓冲液(0.1mol/L)少量洗涤2次,合并滤液和洗液,用盐酸(1mol/L)调节pH5 沉淀,离心收集链激酶沉淀,配制成酶液浓度为50~100U/ml的、pH7.2蒸馏水溶液,得供精制的酶溶液。
沉淀物DEAE-纤维素柱;pH6.6→洗滤液HCl;蒸馏水pH5.5→7.2→酶溶液
吸附、洗脱按每亿单位用800g右左的DEAE-纤维素(精制用)计算投料,加适量的pH6.6磷酸缓冲液(0.01mol/L),搅拌均匀,将酶液通过色谱柱进行吸附,完成后,用少量ph6.6磷酸缓冲液(0.01mol/L)洗涤,以ph6.6磷酸缓冲液(0.08mol/L进行洗脱,收集20000U/ml以上的链激酶洗脱液。
酶溶液DEAE-

双链酶 上下游产品信息

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