稳定细胞株构建

稳定细胞株构建性质、用途与生产工艺

应用

稳定细胞株构建适用于各种研究应用，如重组蛋白和抗体生产、基因编辑、功能性研究等。

构建原理

构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

操作步骤

1.载体构建（表达质粒载体、病毒载体）；
2.转染/感染；
3.目的蛋白初步检测；
4.抗生素筛选；
5.目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6.单克隆细胞株稳定性检测。

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