ALIZ-GAL琼脂的应用

2020/10/27 10:03:52

背景[1-3]

ALIZ-GAL琼脂用于食品、饮料和饮用水的大肠菌群快速检验和计数(GB标准)。

原理:胰蛋白胨提供碳源和氮源满足生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是缓冲剂;月桂基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解培养基中的酶底物Aliz-gal,使茜素游离,并与培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色的螯合物,使菌落呈现相应的颜色。

使用方法:

1.称取本品47.1g,加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装三角瓶,116℃高压10min,备用。

2.以无菌手续取样品25g或25ml,加入含225ml无菌磷酸盐缓冲液的三角瓶内,充分振摇或用均质器均质1min成1:10稀释液,选择三个适宜的连续稀释液,每个稀释度接种两个平皿,倾注加热溶解并冷至45℃左右的培养基。

3.37±1℃培养18-24h。

大肠杆菌检测方法是用无菌吸管吸取稀释度样品1 mL,该样品与乳糖胆盐发酵类似,然后将其放入无菌培养皿中,再加入温度于45℃下的CDLJ JD显色培养基中10 mL的量,并进行培养皿中溶液均匀混合,可以通过快速转动培养皿的方式,等溶液凝固以后,加入5 mL左右,然后快速摇晃培养基,使其可以均匀覆盖平板表面,等其凝固以后,翻转培养基,在温度37℃中培养24 h左右,然后观察其形态,颜色等变化。

除此之外,平行设置两个稀释度培养基,步骤是先稀释样本,通过稀释后,微生物可以分散为单个细胞,然后进行一定环境条件下培养,直到其长成菌落为止,然后进行计算大肠杆菌的数量,通过稀释度和样本数量进行计算。

应用[4][5]

用于大肠菌群快速检测方法的研究

大肠菌群被定义为一群在37℃、24h能够发酵乳糖、产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢的小杆菌。如果在食品中检测到大肠菌群的存在,则说明食品受到了人和温血动物的粪便的污染。如果检测到大肠菌群呈阳性结果,那么便表明该食品已经被粪便污染。

大肠菌群的数量与食品受到的污染程度呈成正比,同时,食品受肠道致病菌的入侵的程度也与大肠菌群的数量成正比。因此检测大肠菌群已经成为对食品的卫生质量进行评估必不可少的一个环节。

目前,检测大肠菌群的方法有很多,培养法包括试管发酵法、平板法、膜过滤法、试纸片法等;现代发展的方法有酶化学法、生物发光法、分子生物学法和免疫学法等。

将大肠菌群试管发酵法和还原法相结合,首先将大肠菌群大量增菌,在代谢过程中能够产生大量氧化还原酶,特定的指示剂与氧化还原酶反应,指示剂的颜色由蓝色变为紫色、粉色直至无色。根据颜色的变化利用光电测色仪对大肠菌群数量进行判定,建立一种新的方法。

参考文献

[1]Evaluation of dry medium(Sanita-Kun)for enumeration of coliforms and Escherichia coli in milk,ice cream,ham,and codfish fillet[J].Jung Hyun Park,Xin Yue Wang,Jong Suk Lee,Myunghee Kim.Food Science and Biotechnology.2012(6)

[2]An advanced PCR method for the specific detection of viable total coliform bacteria in pasteurized milk[J].Takashi Soejima,Jun-ichi Minami,Tomoko Yaeshima,Keiji Iwatsuki.Applied Microbiology and Biotechnology.2012(2)

[3]A rapid method for the detection of representative coliforms in water samples:polymerase chain reaction-enzyme-linked immunosorbent assay(PCR-ELISA)[J].Jong-Tar Kuo,Chiu-Yu Cheng,Hsiao-Han Huang,Chia-Fen Tsao,Ying-Chien Chung.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2010(3)

[4]Sensitive and rapid chemiluminescence enzyme immunoassay for microcystin-LR in water samples[J].F.Long,H.C.Shi,M.He,J.W.Sheng,J.F.Wang.Analytica Chimica Acta.2009(1)

[5]吕肖楠.大肠菌群快速检测方法的研究[D].东北农业大学,2014.

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