板蓝根(ISATIDIS RADIX)为十字花科(Cruciferae)植物菘蓝(lsatis indigotica Fortune)的干燥根,性寒,味苦,具有清热解毒、凉血利咽之功效。表告依春(Epigoitrin)是板蓝根体内产生的含硫生物碱,其为板蓝根抗流感的主要成分之一。然而,药代动力研究发现:表告依春单体的口服生物利用度明显高于板蓝根总提取物,这一研究表明板蓝根中存在阻碍表告依春溶出或吸收的杂质成分,要充分发挥其抗流感作用,必须采用适当方法对其单体成分进行分离、纯化。大孔树脂具有良好的网状结构和很高的比表面积,可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附化合物,从而达到“快速、高效、方便”分离纯化目标化合物的目的。本文将介绍利用大孔树脂分离纯化板蓝根中表告依春的工艺,以期为其工业化生产提供理论依据。
纯化方法[1]
1、样品溶液的制备
将板蓝根粉碎过20~40目筛,称取20g板蓝根粉末,置于250ml的三口烧瓶中,依次加人160ml 去离子水、3g FeSO4・7H2O 4.5gCa(OH)2,于80±5℃条件下搅拌提取60min,过滤,滤渣重复提取1次,合并滤液,滤液浓缩至表告依春含量为20.00mg/ml,得板蓝根样品溶液。
2、树脂预处理
将AB-8、D101、HP-40、ADS-7、NKA-9、HPD-750大孔树脂用去离子水浸泡12h,倾去去离子水,再以2倍树脂体积的浓度为95%的乙醇溶液浸泡2h,充分溶胀后用湿法装柱。用浓度为95%的乙醇洗脱至流出液与水混合不呈白色浑浊,然后,控制流速为2BV/h,依次用浓度2%HCl酸处理2~3h,去离子水洗至中性,浓度5%NaOH碱处理2~3h,去离子水洗至中性。
3、动态吸附和解吸试验
将一定体积树脂采用湿法装入Φ40mmx400mm层细柱中,用恒流泵上样,流出液用自动部分收集器收集,测定流出液中表告依春含量,上样结束后,用去离子水洗至流出液呈无色,再用一定体积的洗脱液以适宜流速洗脱吸附树脂上吸附的表告依春。
4、最佳条件
ADS-7大孔树脂为板蓝根中表告依春纯化的最佳树脂，其分离纯化表告依春的最佳条件是:样品浓度为8.00mg/ml,温度为45℃,pH值为9.0,洗脱剂为浓度40%的乙醇溶液;动态吸附流速为1.5BV/h,动态洗脱流速为2.0BV/h,洗脱液用量为4.0BV。该方法准确、简便、可靠,可用于板蓝根中表告依春的纯化。
参考文献
[1] 熊清平,张强华,徐燕萍,等. 大孔树脂对板蓝根中表告依春的纯化工艺研究[J]. 安徽农业科学,2011,39(30):18542-18544,18568. DOI:10.3969/j.issn.0517-6611.2011.30.061.