抗氧化/自由基检测

自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。自由基检测的方法多种多样，包括自由基相关酶的测定，化学发光测定，吸光度法等。抗氧化活性的检测方法与被测物的性质、组成和检测体系等因素密切相关。自由基是含有未成对电子的原子、分子或原子团。它是线粒体在电子传递的过程中产生的，正常情况下，机体的自由基清除系统可使自由基的产生与消除保持在极低的动态平衡水平上，对机体是有利的。但当体内蓄积过量自由基时，就会损伤细胞，导致动物组织或细胞的氧化损伤。在抗氧化研究中，自由基的检测已成为至关重要的一环，得到了广泛的应用。自由基检测的方法多种多样，包括自由基相关酶的测定，化学发光测定，吸光度法等。以SOD检测为例，介绍其主要原理和实验流程。超氧化物歧化酶（SOD）是一种抗氧化剂，其主要功能是清除机体内的自由基。抗氧化活性的检测模式主要有：1.测量底物（标记底物）或产物的量的变化；2.测量氧化反应的速率；3.测量特征自由基变化的速度或程度；4.测量被测物的抑制率；5.测量被测物产生与标准抗氧化剂同等作用的浓度。黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺成亚硝酸盐，亚硝酸盐在对氨基苯磺酸与甲萘胺作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性抑止作用，使可形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于空白管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中SOD的活力。