重组大鼠FGF-9

重组大鼠成纤维细胞生长因子9(FGF9)重组蛋白原核蛋白表达系统以大肠杆菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。FGF家族成员具有广泛的促有丝分裂和细胞存活活性，并参与多种生物过程，包括胚胎发育，细胞生长，形态发生，组织修复，肿瘤生长和侵袭。分离该蛋白质作为分泌因子，其对培养的神经胶质细胞表现出生长刺激作用。在神经系统中，这种蛋白质主要由神经元产生，可能对神经胶质细胞的发育很重要。发现该基因的小鼠同源物的表达依赖于Sonic hedgehog（Shh）信号。缺乏同源基因的小鼠显示出雄性到雌性的性别逆转表型，这表明在睾丸胚胎发生中起作用。FGF-9基因参与性别决定，肺发育和骨骼发育的模式。重组大鼠FGF-9的制备1.建立大鼠鼠FGF9的原核表达体系,获得纯化的FGF9重组蛋白,采用PCR技术扩增FGF9,并将其克隆入原核表达载体pET30a(+)中2.经测序验证后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达3.采用亲和层析技术进行目的蛋白的纯化4.并用Western blotting进行了免疫原性验证。