鲁米诺

鲁米诺是一种化学荧光分子，在过氧化氢分子存在的条件下可以转变成激发态氨基邻苯二甲酸，后者发出较强的荧光。过氧化氢是许多生物氧化反应的产物，因此很容易通过引入鲁米诺将这些生物氧化反应与光检测联系起来。例如用葡萄糖氧化酶/过氧化氢酶探头能够检测样品中的过氧化氢或葡萄糖的浓度，响应时间仅0.5s(动态法)。
将化学发光物质与免疫学反应结合起来，用光反应表示被测的免疫成分浓度，称为化学发光免疫分析技术(chemiluminescence immune assay，CLIA)。1976年Shmeder提出了化学发光免疫分析，以鲁米诺-H202及衍生物ABEI为检测反应显示系统，目前鲁米诺（luminol）及其衍生物已经是化学发光免疫测定应用中最常用的标记物，它们在碱性条件下，通过微过氧化物酶（microperoxidase）催化，可释放出大量光子，鲁米诺可用于HRP标记抗体的Western Blot和HRP标记探针的核酸杂交检测，也用于现代刑侦血迹检测。
化学发光物质能作为化学发光标记物的化合物须具备下列条件：发光的量子产率高；其理化特性与所研究的体系相匹配；其发光反应是发光物质氧化反应的结果；在所用的浓度范围内对生物体无毒。常用的几类化学发光试剂有：吖啶酯(acridinium ester)，是一种用途广泛的化学发光示踪物，它是一个三环的有机化合物，容易氧化，且氧化反应无需催化剂，在430nm处释放出光子；鲁米诺和异鲁米诺及其衍生物是最成熟的化学发光剂，早在1964年While就作了化学发光的研究报道，鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物用于化学发光免疫测定已取得较理想的效果。
发光率检测：最适荧光波长为400nm（在60mM K2S2O8，100mM K2CO3，pH11.5溶液中检测化学发光率）

图1为鲁米诺结构式。

鲁米诺或称发光胺、光敏灵、流明诺，是通用的发光化学试剂，与适当的氧化剂混合时会发出引人注目的蓝色光。它是白色至淡黄色的晶体，可溶于大多数有机极性溶剂，但不溶于水。法医学上使用鲁米诺来检验犯罪现场含有的痕量血迹，生物学上则使用鲁米诺作为底物来检测细胞中的铜、铁及氰化物的存在。

化学发光法(Chemilum inescence)作为一种灵敏的测定方法被广泛用来检测酶、细胞及生物机体中产生的自由基及反应代谢物，其氧化产物和代谢产物所发出的光可用各种光度计检测。由于化学发光法具有灵敏、快速、操作简单和价格低廉等特点，而被广泛用于抗氧化剂的筛选和研究，如多酚、多糖、黄酮类、蒽醌类活性物质等。测定超氧阴离子常用的化学发光体系有黄嘌呤氧化酶-鲁米诺、邻苯三酚-鲁米诺及二甲基亚砜-鲁米诺三种体系，前者属于酶促体系，后两者则属于非酶促体系。测定羟基自由基的化学发光体系主要有硫酸铜-酵母(或骨髓细胞)-抗坏血酸-双氧水、CuCl-H2O2-邻菲啰啉-碳酸盐缓冲液、硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-鲁米诺5个化学发光体系，均涉及经典的Fenton反应产生羟基自由基，然后攻击发光剂产生化学发光，可以用来衡量提取物清除活性氧自由基的活性。
实验方法：采用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系：鲁米诺用0.05mol/L的NaOH溶液配成0.05mol/L浓度的溶液，在避光处保存，临用前用双蒸水稀释成1mmol/L的溶液，邻苯三酚用1mmol/L HCl配成0.01mol/L的溶液，4℃冰箱中保存，使用前用双蒸水稀释成16倍的6.25×10-4mol/L溶液。0.05mol/L pH10.2 Na2CO3-NaHCO3缓冲液(含0.1mmol/L EDTA)用前现配，实验前与1mmol/L鲁米诺以2：1(体积分数)混合成鲁米诺和碳酸盐缓冲液混合物。测量时，向发光池中注入10.0μL不同浓度的(0，0.08，0.4，2和10mg/mL)样品(以样品缓冲液为对照)，然后注入 6.25×10-4mol/L邻苯三酚0.05mL，最后加入鲁米诺和碳酸缓冲液混合物0.94mL启动反应(30℃)，间隔2s记数发光强度，测定300s的总发光积分强度，本底发光强度为未加邻苯三酚时的发光值。
另外还有化学荧光法、荧光光谱法和NBS-二氯荧光素化学发光体系进行荧光化学发光法的测定方法等，它们的最大优点是灵敏度高。
以上信息由Chemicalbook的晓楠编辑整理。黄色结晶粉末。易溶于碱液，能溶于稀酸，几乎不溶于水，难溶于醇。中性或淡酸性溶液暴露在紫外光中时，显强烈的亮蓝色荧光。熔点329-332℃发光测试: Emmax 440 nm (化学发光; 60 mM K₂S₂O8, 100 mM K₂CO₃, pH 11.5; 添加H₂O₂后) 化学发光试剂及指示剂，常用于化学发光分析，如金属阳离子、血液免疫等等。用于化学发光分析检测试剂，如：测定金属阳离子、血液及糖皮质激素。3-硝基苯二甲酸经环合，还原而得。将3-硝基苯二甲酸加入8%肼水溶液，加热使固体溶化。加乙二醇，在蒸发器内蒸去溶液中的过量水分，在215-220℃下加热2min，使杂环闭合，冷却后得黄色硝基化合物。冷却，加10%氢氧化钠溶液，搅拌，加入连二硫酸钠，加热至沸，保温5min，再加入乙酸，冷却得亮黄色产物。放置过夜，过滤得产物。有毒物品中毒口服-大鼠LD:>500 毫克/公斤可燃;燃烧产生有毒氮氧化物烟雾库房通风低温干燥干粉、泡沫、砂土、二氧化碳, 雾状水