PCR优化试剂盒
PCR优化试剂盒 性质
PCR优化试剂盒提供8种耐热聚合酶和相应的精心配制的缓冲液，其中缓冲液的pH值，盐离子浓度和助溶剂成分等各不相同，当扩增某些复杂的基因模板等出现问题时，应测试不同的聚合酶及反应缓冲体系。另外，PCR优化试剂盒还提供了PCR增强剂，能增加引物的特异性，提高DNA聚合酶的热稳定性，适应较宽范围的退火温度和Mg2+浓度。
标准的PCR过程分为三步：
DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。如图所示：现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。