间羟基苯甲醛

本试剂盒应采用双抗体夹心法测定血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中的含量。1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。 5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。 6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。无色或淡黄色结晶状固体。熔点103-104℃，沸点240℃，191℃（6.7kPa）。微溶于水，溶于热水、乙醇、丙酮、乙醚和苯。能升华，不能进行水蒸气蒸馏。间羟基苯甲醛作为中间体，主要用于医药、香料、染料的制造，还可用于杀菌剂、照相乳化剂，镀镍光泽剂等，由间羟基苯甲醛合成的药物主要有盐酸脱羟肾上腺系、肾上腺素、奎宁、俄妥卡因等。席夫试剂(Schiff's reagent)的显色剂。制药、塑料、染料中间体。杀菌剂。照相乳化剂。用于医药、染料及有机化合物的合成间羟基苯甲醛用作医药、染料、杀菌剂、照相乳化剂等精细化学品的中间体。

以间硝基苯甲醛为原料，可有两种制取间羟基苯甲醛的方法。1.由间硝基甲醛经加成、还原、重氮化、水解而得。将亚硫酸氢钠溶解于水中，加间硝基苯甲醛，于50℃搅拌溶解，得加成物。加成物在碳酸钙存在，与硫酸亚铁加热回流3h，还原为氨基物。将还原液冷至15℃以下，滴加亚硝酸钠溶液重氮化，再于100-110℃水解，即得间羟基苯甲醛。经活性炭脱色、用水重结晶，即得成品。2.由间硝基苯甲醛经氯化亚锡还原，再经重氮化、水解而得。将粉末状二水合氯化亚锡与盐酸配成溶液，冷至5℃，加入间硝基苯甲醛。慢慢升温至25-30℃后，温度迅速上升，当升到100℃时，冷却，剧烈搅拌，得橙色糊状物。加浓盐酸形成悬浮液，搅拌下慢慢加入亚硝酸钠水溶液，温度控制在4-5℃。加完后，搅拌1h。冷却结晶，滤出重氮盐，加到沸水中水解，并用活性炭脱色。趁热过滤，冷却结晶得到成品间羟基苯甲醛。