过氧化物酶（辣根）

辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP, E.C.1.11.1.7）是由酶蛋白和铁卟啉结合而成的一种糖蛋白，该酶由多个同功酶组成，分子量为40kDa，等电点为pH3.0‑9.0。HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别在403nm和275nm，所以人们通常采用RZ值（即OD403nm /OD275nm的比值）来表示该酶的纯度， RZ值越大，纯度越高。

乳过氧化物酶存在于哺乳动物的乳腺、唾液和泪液腺体及其各自的分泌物，即牛奶、唾液和眼泪。它是牛乳和人乳中常见的成分之一，并且存在于迄今为止已经检测过的所有哺乳动物乳中。乳过氧化物酶是发现的首个分泌型过氧化物酶，且在保护哺乳期妇女的乳腺以及新生儿肠道免受病原微生物侵害方面起重要作用，是机体防御体系的一部分。乳腺、唾液和泪腺中的过氧化物酶在化学和免疫学上性质相似。

1.过氧化物酶（辣根）是目前在ELISA中应用最为广泛的标记用酶之一，主要是因为其容易制得，价格相对较低，且性质稳定，耐热和有机溶剂，与抗原或抗体偶联后，活性损失很小。
2. 它也常用与污水处理。工业废水中含有大量的苯酚，双酚A等分类和芳香胺类化合物，等环境污染较大，它可以将这些污染物作为底物，氧化成自由基，自由基在聚集成沉淀聚合物，从而大大降低对环境的污染。
3. 它近几年来被研究用作食品添加剂。由于其本身无毒无害，反应条件温度，反应易控制，近年来被研究用于食品的保鲜，解毒和检测等领域。
4. 检测领域：可以与葡萄糖氧化酶联用，用以检测葡萄糖含量。

（1）将辣根破碎、浸提、离心得到辣根过氧化物酶粗提液；

（2）将辣根过氧化物酶粗提液用截留分子量为70kDa‑100kDa的超滤膜进行超滤分离，得到辣根过氧化物酶超滤液；

（3）将辣根过氧化物酶超滤液用截留分子量为1‑30kDa的超滤膜进行超滤浓缩，得到辣根过氧化物酶浓缩液；

（4）将辣根过氧化物酶浓缩液脱水得到辣根过氧化物酶。

一种猪肉中过氧化物酶的快速定量检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：

(1)配制一系列以辣根过氧化物酶为标准酶的标准酶溶液；

(2)以过氧化脲为反应底物，以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺为显色剂，以磷酸 二氢钠缓冲液为缓冲液，分别测试步骤(1)中所配制的标准酶溶液，测试的反 应温度为20-30℃，反应pH值为4.0-5.0，反应时间为30-90s，反应结束后加入 稀硫酸溶液，终止反应，获得反应产物溶液；

(3)将各反应产物溶液置于紫外分光光度计中，在450nm的吸收波长下分 别测定其OD值，获得辣根过氧化物酶浓度-OD值的标准曲线；

(4)测试待测猪肉中过氧化物酶反应后其反应产物溶液的OD值，根据标 准曲线计算出猪肉中过氧化物酶的浓度。

棕褐色结晶状物质或冻干粉，溶于水，商品有硫酸铵悬浮液，pI7.2，最适pH值7.0。稳定性：冻干粉及2.8mol/L硫酸铵悬浮液于4℃可稳定存在一年。溶液在275nm、403nm、500nm处有最大吸收。酶反应：供体+H2O ═氧化供体十2H2O。用于生化研究，是酶标记法所用的一种主要酶，医药上用于测定生物体液中葡萄糖和半乳糖的含量，用作诊断酶。以辣根为原料，经水抽提后由硫酸铵第一次分级，磷酸钙凝胶纯化，再由乙醇分级，硫酸铵第二次分级，结晶精制得产品。