玻璃酸酶

玻璃酸钠又名透明质酸钠，是广泛存在于动物和人体内的生理活性物质，在人皮肤、关节滑膜液、脐带、房水、眼玻璃体中均有分布，由N-乙 酰葡萄糖醛酸反复交替而形成的一种高分子多糖体生物材料。
本品具有高度的粘弹性、可塑性、以及良好的生物相容性，在预防粘连和修复软组织方面有明显作用。可用于变形膝关节病和肩关节周围炎的 辅助治疗，临床上用于多种皮肤损伤，促进伤口愈合，对于擦伤及撕裂伤，腿部的溃疡，糖尿病性溃疡，压迫性溃疡，以及清创术、静脉淤滞 性溃疡等均有效。
玻璃酸钠为关节滑液的主要成分，是软骨基质的成分之一。在关节腔内起润滑作用，可覆盖和保护关节软骨，改善关节挛缩，抑制软骨变性变 化表面，改善病理性关节液，增加滴滑功能。玻璃酸酶系从哺乳动物睾丸中提取的一种能水解玻璃黏多糖的酶，是一种白色或微黄色粉末，在水中易溶，在乙醇、丙酮或乙醚中不溶。无臭。稳定性较好，42⁰C持续加热60min活力不损失，100⁰C 持续加热5 min活力可保留80%。在低浓度的水溶液中较易失活，一般可用明胶或阿拉伯胶保护防止失活。Fe²⁺、Cu²⁺离子对酶有可逆抑制作用。Pb²⁺、Hg²⁺、Ni ²⁺、等离子对酶活性没有明显影响。在氯化钠（0.15mol/L）或硫酸鱼精蛋白的存在下，硫酸软骨素B（皮肤素）、硫酸类肝素、硫酸角质素、肝素钠及高浓度玻璃酸对玻璃酸酶的抑制作用可被逆转。
玻璃酸酶注射液为玻璃酸酶加适宜的赋形剂，经冷冻干燥的无菌制品，为白色或类白色的冻干块状物或粉末。水溶液不稳定，需临用前配制。玻璃酸酶可作为蛋分分解酶。一般可用来加速肌肉、皮下注射药液的吸收，减轻注射部位疼痛，促进局麻药的浸润，有利于促进手术及创伤后局部水肿或血肿的消散。也可用于肠粘连。但是水杨酸类能抑制玻璃酸酶的作用。不能静脉注射。用前先做皮试，以免出现过敏反应。感染及肿痛部位禁用，以防引起扩散。小鼠皮下注射LD₅₀>25万单位/kg;小鼠肌肉注射LD₅₀>1.25万单位/kg。
皮下或肌肉注射，150～1500U/次，1日1～2次，先用生理盐水或注射用水溶解，再与其他注射剂混合使用；皮下输液，100ml大输液中加本品150U。该品为抗高血压药。小鼠口服LD50为122ml/kg，大鼠LD50为90ml/kg。由1-氯代酞嗪（见9720）经肼化而将1-氯代酞嗪加到水合肼中，在87-89℃搅拌回流12h，趁热过滤。滤液冷却结晶，过滤，得肼酞嗪。肼酞嗪用15%相加酸溶解成盐，再加乙醇使结晶析出，可得肼酞嗪盐酸盐。方法一、牛羊睾丸提取法
切碎、提取将冻冻或新鲜羊睾丸洗净，剥除内外层及副睾丸，切碎，用绞肉机绞成糜浆，称取100kg，倒入预先配好的乙酸溶液（水90L、冰醋酸0.6L、1mol/L盐酸10L 混合而成）中，在-5⁰以下的冻库中，每隔15min用力搅拌3～5min，使之充分提取4h，然后进行扯浆，得浆液约125～140L。浆渣备第2次提取玻璃酸酶用。
羊睾丸^Hac;HCl;-50→_提取提取液
盐析、吊滤取第一次浆液，在不断搅拌下每升浆液中加入硫酸铵（工业用）210g。使之安全溶解，静止1h后，转入双层用涤纶袋吊滤，反复两次。次日得澄清滤液，在不断搅拌下每升加入硫酸铵290g。使之完全溶解，静止1h 后，用涤纶袋吊滤，过夜，次日拆袋，得粗制品。
提取液^{（NH₄₂SO₄}→_{盐析；吊滤}粗品
盐析、透析取精品溶于5L的冰冷蒸馏水中，缓缓加入硫酸铵固体125g，并不断搅拌，使之完全溶解，于冷库中静置过夜，次日除去液面油脂，用胶管虹吸中层清液，用布氏漏斗过滤，上层和底层沉淀最后用布氏漏斗过滤，合并滤液。在滤液中缓缓加入750g硫酸铵，充分搅拌，待完全溶解后，于冷库中放置过夜。次日，弃去上层清液（如上层溶液浑浊不清，可在冷库中放置3～5d ，待上层溶液变清）得盐析沉淀物，再溶于0.5L冰蒸馏水中，进行透析，每袋约100ml，放在pH6.5的磷酸盐-枸橼酸缓冲液[枸橼酸7.5g、磷酸氢二钠（12个结晶水）62g、氯化钠70g加水配制成2500ml，用枸橼调整pH6.5]2500ml中，于冷库透析24h，得透析液。酶活力约250000U/ml。
粗品^{（NH₄）₂so₄;磷酸盐-枸橼酸}→_{pH6.5；盐析；透析}透析液
去热原、干燥将透析液离心分离，离心液置于冰冷的水溶中，加入Na₃PO₄·12H₂O(150g/L即15%)溶液50ml, 缓缓加入乙酸钙（200g/L即20%）30ml,并不断搅拌。随后用氢氧化钠（0.5mol/L）调节pH至8.5，继续搅拌10min，4号垂熔玻璃漏斗过滤（滤并瓶放在冰水浴中），滤液用盐酸（ 0.5mol/L）中和pH为7，冷冻干燥，得酶精制品。
透析液^{Na₃PO₄；Ca(Ac)₂; pH8.5}→_去热原精制品^HCl;pH7→干燥干精制品
冻干制剂取一定量精制品溶于5%的明胶注射用水溶液中，用氢氧化钠调节pH5～7，除菌，过滤，分装，每瓶0.5ml, 冷冻干燥，即得注射用玻璃酸酶制剂，每瓶含玻璃酸酶100或150U，按睾丸质量计算收率约为20000U/kg。
干精制品^{5%水解明胶；pH6}→_制剂冻干制剂成品
方法二微生物发酵法
培养、发酵培养基；
淀粉1份；棉子饼1份；谷胱粉1份；
干酵母1份；磷酸氢二钾0.1份^{链霉菌；300C;3d}→_发酵发酵液
消泡剂0.4%
沉淀、分离
发酵液→浓缩液^丙酮→_沉淀粗品^色谱柱→_分离精制品
冷冻、干燥
精制品^{5%水解明胶}→_冷冻干燥冻干制剂成品