MRNA提取试剂盒

mRNA提取试剂盒构建cDNA文库、蛋白质的体外翻译和RT-PCR方法检测稀有的mRNA等研究常常需要从总RNA中分离mRNA，mRNA只占总RNA的1%左右，但由于带poly（A）尾巴，所以可以通过与Oligo（dT）的亲和结合而与其RNA（如rRNA、tRNA等）分离开。mRNA提取试剂盒包括一套用于固、液相分离的分离装置；所述分离装置中至少包含一层纤维素固相载体；该试剂盒还包括下述所有成份：至少有一管为细胞或组织裂解液；至少有一管为生物素化Oligo(dT)探针；至少有一管为结合缓冲液；至少有一管为洗脱缓冲液。该试剂盒操作简便、快速、高效，适合用于生物样品中mRNA的分离提取。其主要特征在于分离装置中采用纤维素为固相载体，利用融合蛋白CBD-SA作为生物桥联剂，以生物特异性偶联法代替传统的物理吸附法和化学键合法活化纤维素固相载体，活化后的固相载体能够高效率的结合生物素化的试剂，可用于蛋白或核酸的分离。常温运输，4℃保存，Oligo(dT)纤维素低温运输，-20℃保存，有效期一年。将0.5 mL结合液加入到一管装有1 mg Oligo(dT)纤维素的离心管中，放置5分钟后离心吸弃上清后待用。将制备的总RNA 100 μL加热到65℃ 5分钟后加入等体积的结合液，转移到装有Oligo(dT)纤维素的离心管中，颠倒混匀数次，离心后将上清转移到一个离心管中。用0.5 mL结合液，混匀后4℃ 200 g 离心5分钟，小心弃上清。重复上步洗3-5次，用RNase-free水洗脱mRNA，用微量核酸沉淀剂沉淀回收mRNA。