在现代生物医学研究中，流式细胞术是一种用于分析和分选单个细胞的强大工具。无论是细胞表面标志物的检测、细胞内因子的分析，还是细胞凋亡的研究，流式细胞术都能提供快速、精确的结果。然而，流式细胞术的成功实施依赖于多种试剂的正确选择和使用，包括抗体稀释剂、细胞固定液、消化液等。了解和掌握这些常用试剂的配制方法和作用机制，是确保实验结果准确、可重复的关键。本文将详细介绍流式细胞术常用试剂及其作用，为实验工作者提供指导和参考。
■10％ NaN3溶液
将10g NaN3溶解于100 ml蒸馏水中，室温保存。在活体实验或使用辣根过氧化物酶反应时，可以不使用NaN3。
作用：NaN3 是一种广泛用于抑制酶活性的化学试剂，主要用于防止细胞溶液中的微生物污染和酶活性。它通过抑制电子传递链中细胞色素氧化酶的活性来阻止细胞代谢活动。
■3％ BSA/PBS溶液
在100 ml PBS中加入3 g BSA，充分溶解后，再加入0.2 ml 10％ NaN3溶液。
作用：BSA（牛血清白蛋白）是一种常用的蛋白质稳定剂，可在细胞染色和抗体反应过程中防止非特异性结合，从而提高实验的特异性和灵敏度。
■500 mmol/L EDTA溶液
将186 g EDTA·Na₂·2H₂O溶解于400 ml蒸馏水中，用NaOH调节pH至8.0，再用蒸馏水补足至500 ml。分装后进行高压灭菌，室温保存。
作用：EDTA是一种螯合剂，能够有效结合二价金属离子（如Ca²⁺和Mg²⁺），从而抑制某些酶的活性，防止凝血和细胞聚集。常用于细胞悬液的制备和红细胞裂解液中。
■4％ Paraformaldehyde
在磁力搅拌下，将4g Paraformaldehyde溶解于100 ml PBS中，加入几滴NaOH，在通风柜中于60℃加热至完全溶解，调节pH至7.4。此溶液应在使用前新鲜配制。
作用：Paraformaldehyde是常用的固定剂，可通过交联蛋白质和DNA分子，保持细胞和组织形态。它能有效防止细胞或组织在染色或观察过程中发生形态改变，是细胞固定的常用试剂。
■消化液
0.25％胰蛋白酶（用培养液或PBS配制）或0.25％胰蛋白酶与0.02％ EDTA的混合液。
作用：胰蛋白酶是一种蛋白酶，可将细胞间基质蛋白降解，常用于细胞消化、分离和传代。EDTA的加入有助于减少细胞间的粘附性，提升细胞分散效果。
■红细胞裂解液
NH₄Cl 4.16 g、KHCO₃ 0.5 g、EDTA·2Na 0.02 g溶于100 ml水中，调节pH至7.2，然后补充蒸馏水至500 ml。4℃储存，使用时需恢复至室温。
作用：用于裂解全血样品中的红细胞，以便保留白细胞和其他免疫细胞。NH₄Cl能通过渗透作用使红细胞溶解，而EDTA则能防止白细胞凝集和过度激活。
■流式细胞抗体稀释剂
0.1 mmol/L PBS液（pH 7.4）＋1％ BSA＋0.1％ Na₂N₃。
作用：用于稀释流式细胞实验中的抗体。含有的BSA和Na₂N₃可以稳定抗体活性，防止非特异性结合和污染。
■常用细胞破膜剂
PBS液（pH 7.4）＋1％ FBS（或BSA）＋0.1％ NaN₃＋0.1％ 皂草苷（推荐使用Sigma品牌）。
作用：通过破坏细胞膜的通透性，使抗体或染料更容易进入细胞内部，常用于细胞内标志物的染色。
■流式细胞染色洗涤液
含2％ BSA、0.1％ NaN₃的PBS（pH 7.4）。
作用：用于流式细胞术染色后细胞的洗涤。BSA能防止细胞粘附，而NaN₃能防止污染和酶活性变化。
■PI染液（10×浓缩液，用于细胞周期和凋亡检测）
10 mg PI溶于10 ml PBS中，加入2 mg无DNA酶的RNA酶，4℃保存备用。应用时10倍稀释，每管加0.3 ml～0.5 ml PI染液。
作用：PI（碘化丙啶）是一种核酸染料，能够嵌入双链DNA。由于无法穿透完整细胞膜，只能进入死细胞，因此常用于检测细胞凋亡和死细胞比例
■Hanks液的配制（BSS）
原液A： NaCl 160 g、MgSO₄·7H₂O 2 g、KCl 8 g、MgCl₂·6H₂O 2 g、CaCl₂ 2.8 g，溶于1000 ml双蒸水。
原液B： Na₂HPO₄·12H₂O 3.04 g、KH₂PO₄ 1.2 g、葡萄糖 20 g，溶于800 ml双蒸水。
应用液： 原液A 1份，原液B 1份，双蒸水18份，混合后分装于200 ml小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的5.6％ NaHCO₃调节pH至7.2～7.6。
作用：Hanks液是一种不含钙、镁离子的平衡盐溶液，主要用于细胞培养、稀释和清洗。它能够提供等渗环境，防止细胞因渗透压变化而破裂。
■磷酸盐缓冲液（PB）的配制
A液（0.2 mol/L NaH₂PO₄水溶液）： NaH₂PO₄·H₂O 27.6 g，溶于蒸馏水中，稀释至1000 ml。
B液（0.2 mol/L Na₂HPO₄水溶液）： Na₂HPO₄·7H₂O 53.6 g，溶于蒸馏水中，补加至1000 ml。
作用：PB是一种常用的生物缓冲液，能够维持实验环境的稳定pH，避免实验过程中pH波动引起的细胞和酶活性变化。
■PBS的配制
在相应的PB基液中加入8.5 g/L NaCl即可。
作用：PBS是一种通用缓冲液，主要用于细胞清洗和样品稀释。其pH稳定性好，能在实验过程中维持细胞正常的生理状态。