研究背景
水稻（Oryza
sativa）的籽粒白垩质会负面影响籽粒品质，包括质地、碾磨韧性及消费者偏好。2025年发表在《Plant
Communications》（DOI：10.1016/j.xplc.2025.101354）上的一篇研究，由中国国家水稻研究所水稻生物学与育种国家重点实验室的研究人员完成，鉴定出CHALK10是一种F-box蛋白，通过介导SEMIDWARF-1（SD1）的泛素化和26S蛋白酶体途径降解，负调控籽粒白垩质。研究揭示CHALK10与SD1相互作用，影响赤霉素（GA）水平和淀粉代谢，从而影响胚乳发育和白垩质形成。
客户需求
水稻生物学与育种国家重点实验室需要高纯度重组CHALK10和SD1蛋白，用于共免疫沉淀（co-IP）实验，以验证它们在水稻胚乳发育中的相互作用。此外，他们还需要针对这些蛋白的兔多克隆抗体，用于泛素化和降解研究的免疫印迹实验。普健生物（AtaGenix
Laboratories Co.,
Ltd.）受委托提供基于大肠杆菌表达系统的定制蛋白表达、纯化及兔多克隆抗体生产服务，确保与co-IP验证及下游免疫学实验的兼容性。
技术挑战
1. 蛋白表达：在大肠杆菌中实现功能性CHALK10和SD1蛋白的高产表达，而大肠杆菌缺乏真核生物的翻译后修饰系统。
2. 蛋白纯度：确保高纯度蛋白，以满足敏感的co-IP实验需求，验证蛋白-蛋白相互作用。
3. 抗体特异性：生产具有高特异性和敏感性的兔多克隆抗体，用于在复杂的水稻蛋白提取物中检测CHALK10和SD1。
定制蛋白与抗体解决方案
1. 蛋白表达与纯化：
- 使用pMAL-c2X（MBP标签CHALK10）和pGEX-6P-1（GST标签SD1）载体在大肠杆菌Rosetta（DE3）细胞中表达CHALK10和SD1蛋白，以实现高产生产。
- 通过谷胱甘肽和直链淀粉亲和层析法纯化重组蛋白，确保高纯度，适合co-IP和体外泛素化实验。
2. 兔多克隆抗体生产：
- 用纯化的CHALK10和SD1蛋白免疫兔子，生成高滴度多克隆抗体。
- 通过Western印迹验证抗体特异性，确认在水稻原生质体提取物中对CHALK10和SD1的强特异性检测。
3. 验证与支持：
- 支持co-IP实验，确认CHALK10-SD1相互作用，使研究团队能够验证CHALK10通过26S蛋白酶体途径介导SD1降解的作用。
- 提供优化抗体在免疫印迹实验中性能的技术支持，促进体内实验中泛素化SD1的准确检测。
高纯度CHALK10和SD1蛋白以及特异性兔多克隆抗体使研究团队能够确认CHALK10-SD1相互作用及其通过赤霉素介导的淀粉代谢调控水稻籽粒白垩质的作用。通过co-IP验证等推动了对水稻籽粒品质分子机制的理解。
我们的专业团队提供从蛋白设计到实验验证的全面支持，推动您的研究取得重大发现。