客户背景
桔梗（Platycodon
grandiflorus）是一种广泛应用于抗炎、抗肿瘤和认知增强的药用植物，其生物活性主要来源于三萜皂苷，如桔梗皂苷D（PD）和桔梗皂苷D3（PD3）。安徽中医药大学研究团队在《International
Journal of Molecular
Sciences》发表的研究（DOI：10.3390/ijms26104832）鉴定出桔梗中107个UDP-糖基转移酶（UGT）基因，其中PgUGT29催化PD向PD3的糖基化反应，这是皂苷生物合成的关键步骤。该研究为药用植物活性化合物的代谢工程提供了基础。
客户需求
研究需要在大肠杆菌中异源表达并纯化PgUGT29和PgUGT72蛋白，以验证其酶活性，同时开发特异性抗体，研究蛋白相互作用并确认PD在C3位的糖基化活性，为阐明皂苷生物合成途径提供支持。
技术挑战
1. 蛋白表达与纯化：植物来源的UGT蛋白（如PgUGT29和PgUGT72）在大肠杆菌中常表现为低溶解性和错误折叠，需优化表达条件和重折叠策略，以实现高纯度（>95%）和功能活性。
2. 抗体特异性：开发针对PgUGT29的抗体需设计特异性表位抗原，确保高特异性和低交叉反应性，这对Western blot和免疫荧光等复杂实验的准确检测至关重要。
3. 功能验证：确保重组UGT蛋白在体外实验（如HPLC糖基化实验）中保持酶活性，并保证抗体在分子研究中精确检测目标蛋白，需要严格的质量控制和验证。
技术服务解决方案
普健生物为桔梗UGT研究提供定制蛋白表达和抗体开发服务：
1. 重组PgUGT表达与纯化：
(1)
使用IPTG诱导（1
mM，37°C，4小时）在大肠杆菌BL21（DE3）中表达His标签的PgUGT29和PgUGT72，通过Ni-NTA亲和层析和尿素透析重折叠，获得纯度>95%、浓度为0.21–0.50
mg/mL的蛋白，经SDS-PAGE和Western blot验证。
(2) 采用Bradford法量化蛋白，满足HPLC酶活性测试需求。
2. 抗PgUGT29抗体定制与验证：
(1) 设计针对PgUGT29特异性表位（例如PSPG基序区域）的抗原，生产兔源多克隆抗体，通过Western blot和免疫荧光验证其特异性，确保在植物组织中准确检测PgUGT29。
(2) 在4–6周内交付抗体，符合项目时间要求。
3. 功能验证支持：
(1) 提供基于HPLC的酶活性实验，确认PgUGT29以UDP-Glc为供体催化PD向PD3的转化，采用PgUGT72作为阴性对照以确保特异性。
(2) 支持分子对接研究，识别UDP-Glc结合的关键残基（如T145、D392、Q393、N396），加深对酶-底物相互作用的理解。
我们的蛋白表达和抗体定制服务成功实现了PgUGT29和PgUGT72的表达与纯化，HPLC验证确认PgUGT29催化PD向PD3的转化。抗PgUGT29抗体展现出高特异性，精准检测目标蛋白，支持了功能研究的顺利开展。这些成果为阐明桔梗皂苷生物合成途径提供了重要支持，推动了药用皂苷（如PD3）在药物开发中的代谢工程应用，显著提高了其潜在产量。
普健生物专业团队提供从蛋白设计到功能验证的全方位支持，助力您的植物生物技术和天然产物开发研究在全球产生影响！