判断目标蛋白是否具有活性，通常需要结合生物学功能检测和结构/纯度分析两种方法。以下是具体判断依据和常用技术：
一、生物学功能检测
通过实验直接验证蛋白的预期功能，这是判断活性的最直接证据。常用方法包括：
1、细胞增殖/毒性检测：如检测细胞因子是否能促进特定细胞系的增殖。
2、结合实验：如ELISA检测蛋白与受体的结合能力。
3、酶活性测定：对酶类蛋白，需测定其催化底物转化的能力。
4、中和实验：如用中和抗体阻断蛋白功能，观察预期表型是否消失。
二、活性定量指标
ED50（半数有效量）：指达到50%最大反应所需的蛋白浓度，ED50值越小，活性越强。
比活性（Specific Activity）：单位质量蛋白的活性单位，公式为：
比活性（Units/mg）= 1 × 10^6 / ED50（ng/mL）。
三、结构/纯度分析
Western Blot：验证蛋白的正确分子量和表达量，但需注意存在条带≠有活性。
SDS-PAGE：检测蛋白纯度，高纯度是活性的基础。
质谱法：精确测定分子量，确认蛋白序列正确性。
四、注意事项
检测方法依赖性：同一蛋白在不同实验（如不同细胞系）中测得的ED50可能不同，需明确实验体系。
内毒素水平：若用于细胞/动物实验，需控制内毒素含量（通常要求<1 EU/μg）以避免干扰
核心结论：
活性判断需以生物学功能检测为核心，结合ED50、比活性等定量指标，并辅以结构验证（如Western Blot、质谱）。仅凭电泳条带无法确认活性，必须通过功能实验验证。