胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分，在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。胶原蛋白I（Collagen, Type I）是由2 个α1 链和1 个α2 链组成的异源多聚体（图1），在37℃，中性pH 下自发形成三螺旋骨架，是一种优秀的细胞培养用基质，广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。
图1胶原蛋白I分子模型
鼠尾胶原蛋白I 是根据Birkedal-Hansen 方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿，培养细胞表面粘附性，特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞，比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备，模拟真实的生长环境，使得细胞在三维环境中生长。
本品为溶于6mM HAc 的无菌溶液（图2），浓度5mg/ml，每个批次产品皆通过细胞培养测试（包括三维空间培养）以保证质量的可靠性。接下来我们了解鼠尾胶原蛋白I的两种用途吧。
鼠尾胶原蛋白I (abs47014921)
1.细胞培养器皿的表面包被
组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5μg/cm2，起始浓度可首选5μg/cm2。建议根据具体细胞类型来优化。
1.1 6mM HAc稀释液的制备
本品以溶于6mM HAc（=0.36g/L HAc）的无菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建议用6mM HAc溶液做进一步稀释。配制方法：取34.5μl 冰醋酸（17.4 M）加入100ml双蒸水，充分混匀后即得到6mM HAc溶液，0.22μm滤膜过滤除菌后待用。
1.2包被步骤
a，根据自身实验体系以及优化后的包被浓度来计算所需的胶原蛋白量，并加入相应孔内，确保胶原蛋白溶液完全覆盖表面。
1） 以包被浓度为5μg/cm2，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如50μg/ml， 然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；
2） 以包被浓度为2μg/cm2，先用6mM HAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如12μg/ml，然后参考表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；表1 不同培养皿内胶原蛋白加量表
培养器皿
表面积（cm2,每孔或每皿）
当包被浓度：2ug/cm2，中间稀释浓度12ug/ml，加入该稀释液体积（ul）
当包被浓度：5ug/cm2，中间稀释浓度50ug/ml，加入该稀释液体积（ul）
b，室温孵育1h，小心吸掉多余液体，用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后，在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下，包被好的器皿在4-25°C至少可保存3个月。
2.三维胶原的制备
当鼠尾胶原蛋白I使用浓度>1mg/ml，pH 7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶，建议成胶浓度为1-2 mg/ml。
由于本品是以溶于6mM HAc的无菌溶液形式提供，在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1M NaOH中和。
2.1需要溶液准备（无菌、预冷）
10×细胞培养液（依据培养的细胞种类而定）
0.1M NaOH
无菌水（abs9259）
2.2三维胶原制备（不含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
取200μl胶原蛋白（5mg/ml）加到置于冰浴的离心管内，加入690μl无菌水。之后加到12μl 0.1M NaOH【注意 ：该步骤不能反，如果反过来把12μl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结】，立即混匀。再加入100μl 10×细胞培养液，混匀后立即加到培养器皿中【注意：混匀后pH为7.0左右，如果培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试】。
将培养器皿在室温（25°C左右）放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。
三维胶原制备（含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：
准备好细胞悬液，并放置于冰浴中。b，将200μl胶原蛋白（5mg/ml）加到12μl 0.1M NaOH【注意 ：该步骤不能反，如果反过来把12μl 0.1M NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结】，立即混匀。再加入23μl 10×细胞培养液，立即混匀【注意：混匀后pH为7.0左右，如果培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试】。再加入760μl 的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。
c，将培养器皿在室温（25°C左右）放置20min待胶凝固后，加入适当体积细胞培养液，转移到培养箱中培养。
注：图源网络和客户，仅供参考学习用
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