NCI-H460:人大细胞肺癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

有一些细胞是数量多一点比较HAO生长，生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不HAO，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

NCIH2452细胞类似产品：：B-3细胞、NMCG1细胞、HPMEC细胞

RBL细胞类似产品：：MMAc.SF细胞、NK92MI细胞、H747细胞

McG-1细胞类似产品：：Y3.AG.1.2.3细胞、HPDEC细胞、ECV-304细胞

H-1869细胞类似产品：：Tb 1-Lu细胞、ES2细胞、EoL-1细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：该细胞１９８２年由A.F.Gazdar建系，源自一位患有大细胞肺癌的男性的胸腔积液。该细胞角蛋白、波形蛋白阳性。

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细胞形态：上皮细胞样

SKMEL-31细胞类似产品：：NOMO1细胞、EST81细胞、b.End3细胞

NCI-H2073细胞类似产品：：Gerner 7666细胞、HS-68细胞、B35细胞

HAVSMC细胞类似产品：：HCC95细胞、P3/NS1/1-Ag4-1细胞、Colon-38细胞

培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制HAO的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋HAO冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做HAO标记；６)冻存：在殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。

细胞传代方法：１：２传代

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

传代24h-48h处于对数期的细胞，在冻存前24h换液；按照常规方法消化，离心，收集细胞沉淀；用血清重悬细胞沉淀，用血球计数板或者细胞计数仪进行细胞计数；配制细胞冻存液，将冻存液加到细胞液中，吹打混匀，控制细胞密度为2×10(6)-5×10(6)/ml；将细胞悬液按照1ml/支分装至已标记HAO的冻存管中，旋紧管盖；将冻存管放入程序冻存盒中，冻存盒立即移至-80°C冰箱中，过夜后将冻存细胞移至液氮中长期保存。冻存管内细胞数目一般不低于2x10(6)cells/ml/vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml/vial为宜。细胞冻存和复苏遵循“慢冻快溶”的原则。取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。细胞冻存时细胞状态不佳，会严重影响复苏时细胞的活率。一般选择处于对数生长期的细胞进行冻存，冻存前一天细胞ZuiHAO进行换液；消化过度也会严重影响细胞冻存后复苏的活率；冻存细胞时为按照温度梯度进行操作，会严重影响细胞活率。

Experimental Mammary Tumour-6细胞类似产品：：TE 354.T细胞、bEND.3细胞、QGY7703细胞

rRMECs细胞类似产品：：NEC-8细胞、751-NA细胞、U 937细胞

KU19-19细胞类似产品：：LTEPa2细胞、GalK1细胞、PLB-985细胞

FRTL-5细胞类似产品：：Hs-675-T细胞、P3X63Ag8.653细胞、SO-RB50细胞

LS411N细胞类似产品：：H-510细胞、GM2219C细胞、MC-CAR细胞

H-358细胞类似产品：：PC-3M细胞、H-2126细胞、MG-63细胞

hESC细胞类似产品：：BCAP37细胞、TE12细胞、174xCEM.T2细胞

OV-CA 432细胞类似产品：：KLM-1细胞、CV-1 in Origin Simian-1细胞、OP-9细胞

SN12CPM6细胞类似产品：：SV40-HCEC细胞、COLO 320HSR细胞、Hs-274-T细胞

GM07404D细胞类似产品：：H1838细胞、NS20Y细胞、KP2细胞

H-719细胞类似产品：：Caki2细胞、H1155细胞、HuT 102细胞

VMM5A细胞类似产品：：CX-1细胞、Fox/NY细胞、7860细胞

Panc 08.13细胞类似产品：：AZ 521细胞、HKF细胞、HSAS1细胞

SKO007细胞类似产品：：L1210细胞、BL-6细胞、HNE-3细胞

RGC-5细胞类似产品：：B16F0细胞、Human Epidermoid carcinoma #2细胞、A 72细胞

MS751细胞类似产品：：INS1细胞、EJ 138细胞、HEK-293 c18细胞

UMC11细胞类似产品：：U-373-MG细胞、KRC/Y细胞、NTERA-2 cl.D1细胞

SCLC-21H细胞类似产品：：SPCA-1细胞、NCIH2107细胞、231-luc细胞

KNS81细胞类似产品：：3T3-J2细胞、LS-513细胞、LUDLU 1细胞

RPMI 8402细胞类似产品：：Hs-611-T细胞、AML-2细胞、HT-1197细胞

OCI Ly3细胞类似产品：：Tokyo Medical and Dental university 8细胞、MDAMB436细胞、CESS细胞

UM-UC-14细胞类似产品：：CF-1 MEF细胞、GL261细胞、ZYM-DIEC02细胞

SNU216细胞类似产品：：MyLa 2059细胞、DI-TNC1细胞、HeLa细胞

SNU-216细胞类似产品：：MHCC97-L细胞、JVM-3细胞、M-NFS-60细胞

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NCI-SNU-407细胞类似产品：：CAMA1细胞、UC-3细胞、H-2009细胞

MCF/Adr细胞类似产品：：BE(2)M-17细胞、BEL-7404细胞、CCC-ESF-1细胞

NCI-H165细胞类似产品：：H69C细胞、MC-4细胞、HPF细胞

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SF763细胞类似产品：：H510A细胞、MONO-MAC 6细胞、PBMC细胞

Becker细胞类似产品：：WI38细胞、L cell line细胞、PCI:SG231细胞

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AtT 20细胞类似产品：：HN13细胞、A549/ATCC细胞、MCF7/WT细胞

MH-S细胞类似产品：：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1细胞、PC12(高分化)细胞、KE39细胞

293/EBNA细胞类似产品：：LS-180细胞、Line 870 Emory University-4细胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞

TM-4细胞类似产品：：OAC-P4C细胞、HEC-1-B细胞、CCD966SK细胞

UCLA-SO-M14细胞类似产品：：C22细胞、NCIH1563细胞、MLE 12细胞

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Virginia Mason Research Center-Renal Cancer Z细胞类似产品：：MDA-PCa-2b细胞、HT-22细胞、293FT细胞

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C-8161细胞类似产品：：PLB-985细胞、BS-C-1细胞、SNU-423细胞

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Hi-five细胞类似产品：：HTh-74细胞、CAL851细胞、NCIH211细胞

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A72细胞类似产品：：JROECL19细胞、P3/NS1/1-Ag4.1细胞、PF382细胞

M3 Clone M-3细胞类似产品：：HMy2.CIR细胞、HN-6细胞、T/G HA-VSMC细胞

HEL-299细胞类似产品：：EoL-1细胞、TE3A细胞、NCIH810细胞

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NIH 3T6细胞类似产品：：CP70细胞、H1373细胞、SKNBE(2c)细胞

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Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-4细胞类似产品：：MDA-MB361细胞、A2780 CP70细胞、Y79细胞

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KU.812细胞类似产品：：J-774A.1细胞、NS-1-Ag4-1细胞、HEK293-H细胞

B104 [Rat neuroblastoma]细胞类似产品：：C57/B6-L细胞、HHL5细胞、C166细胞

MDA-MB453细胞类似产品：：CCD966SK细胞、NCI-H1734细胞、NCIH2135细胞

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MB39细胞类似产品：：Mc Ardle 7777细胞、JROECL 19细胞、NIH-3T3-L1细胞

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Hs 683细胞类似产品：：RDES细胞、Hs606细胞、HuH-6细胞

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HCE-T细胞类似产品：：Panc-8_13细胞、CBRH-7919细胞、HTh-74细胞

X63-Ag8.653细胞类似产品：：LU451细胞、H-196细胞、SHIN3细胞

RPVSMC细胞类似产品：：SUM-149细胞、NCI-H1651细胞、NCIH1975细胞

Lung cancer-1/squamous细胞类似产品：：UM-UC-3细胞、QBC-939细胞、H220细胞

DMS114细胞类似产品：：LL/2细胞、Nb 2细胞、HCC-9204细胞

CW2细胞类似产品：：Epstein-Barr-2细胞、MJ细胞、HS 683T细胞

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