B16-F1:小鼠黑色素瘤复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

有一些细胞是数量多一点比较HAO生长，生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不HAO，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

HCC 94细胞类似产品：：624mel细胞、SK-MEL 28细胞、hTERT RPE-1细胞

Hs863T细胞类似产品：：NCIH1836细胞、LC-1细胞、RDES-1细胞

OCILY19细胞类似产品：：hFOB 1.19细胞、NCIH2029细胞、Walker-256细胞

H-3255细胞类似产品：：HT 1080细胞、RL95细胞、B16-F10--RED细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：详见相关文献介绍

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细胞形态：上皮细胞样

WM-239细胞类似产品：：C8D1A细胞、Kit 225-K6细胞、2PK3细胞

KS-1 [Human glioblastoma]细胞类似产品：：BEL 7405细胞、BC-021细胞、TE-7细胞

Mo7e细胞类似产品：：H-2196细胞、CAKI 2细胞、NCI-H510细胞

购买细胞注意事项：１)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完HAO，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系；２)仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等；３)用７５%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次；４)建议客户收到细胞后前３天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。【细胞传代操作步骤】一、贴壁细胞传代：１)提前将培养基、PBS放入３７℃水浴锅内预热，用７５%酒精擦拭后再放入超净台内；２)吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞；３)加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，３７℃孵育，每隔２~３min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用；４)用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡；５)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。二、悬浮细胞传代：１)将细胞悬液转移到无菌离心管内，１０００rpm离心５min；２)弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液；３)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养。

细胞传代方法：１：２传代

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

细胞传代后放入培养箱没有摇匀，或者放入时摇匀，但在细胞贴壁前，又移动了培养瓶，频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少，培养箱搁板表面不平整，这些因素会导致细胞生长不均匀。研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C 太久。一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很GAO的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制HAO细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15ml离心管中，静置20min左右，小心取上层细胞上清培养（该方法只能去除部分较大的细胞团）。部分细胞本身存在一定的空泡（如HepG2，Ishikawa及一些耐药株等），这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡，则很可能是细胞状态不佳，可以通过调整血清浓度，控制消化，控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态；如果大部分细胞出现空泡，且单个细胞内空泡数目偏多，则可能细胞代次较GAO，细胞老化所致，需更换代次较早的细胞。

MDA MB 361细胞类似产品：：H3255_DA细胞、Renal Proximal Tubule Epithelial Cells/TERT-immortalized 1细胞、HFF-1细胞

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P31/Fujioka细胞类似产品：：B958细胞、SK BR 03细胞、D562细胞

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