KYSE-270:人食道鳞状细胞癌复苏细胞(提供STR鉴定图谱)

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细胞生长：贴壁

有一些细胞是数量多一点比较HAO生长，生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不HAO，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞建议只吹打，不消化）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。通常称之为“二传”。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞上乘形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。

细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

Panc 5.04细胞类似产品：：WBF344细胞、CA-OV-3细胞、MESSA Dx5细胞

C42细胞类似产品：：LUDLU-1细胞、1E8-H细胞、PLA 802细胞

SKN-SH细胞类似产品：：Hs606细胞、GOS-3细胞、B16-F0细胞

A-253细胞类似产品：：RPMI2650细胞、GA-10-Clone-4细胞、SW756细胞

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

细胞背景资料：详见相关文献介绍

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细胞形态：上皮细胞样

87MG细胞类似产品：：BJA-B-1细胞、SK-RC 42细胞、GA10细胞

SK-N-SH细胞类似产品：：Moorfields/Institute of Ophthalmology-Muller 1细胞、DMS-79细胞、STC-1细胞

H1573细胞类似产品：：HUT 125细胞、OSK-1细胞、NK-10A细胞

细胞传代培养的胰酶消化法：传代培养：是指细胞从一个培养瓶以１：２或１：２以上的比例转移，接种到另一培养瓶的培养。传代细胞，可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代，部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤：①入无菌室之前用肥皂洗手，再用７５% 的酒精擦拭消毒双手；②倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液３７℃下预热；③超净台台面应整洁，用７５%酒精棉球擦拭清洁；④打开超净工作台的紫外灯照射台面２０min左右，关闭紫外灯，打开风机清洁空气除去臭氧；⑤点燃酒精灯;取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内；⑥将培养用液瓶口用７５%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上；⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用２-３ml Hanks液洗去残留的就培养基，或用少量胰酶涮洗一下；⑧每个大培养瓶加入１ml胰酶，小培养瓶用量酌减，盖HAO瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中；⑨加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化HAO的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(７-１０ml/大瓶;３-５ml/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖HAO瓶盖，适度拧紧后稍回转，以利于CO２的进入，将培养瓶放回CO２培养箱；⑩对悬浮培养细胞，步骤７-９不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。

细胞传代方法：１：５传代

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁生长

贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良HAO，当补液时，需避免反复吹打。

IHHA-1细胞类似产品：：G402细胞、BEL 7405细胞、TE-32细胞

Becker细胞类似产品：：WI38细胞、L cell line细胞、PCI:SG231细胞

HPBALL细胞类似产品：：HBL100细胞、FDCP1细胞、3T3-F442A细胞

RMC-1细胞类似产品：：VM-CUB-I细胞、LC-1-sq细胞、HuT102细胞

TM4细胞类似产品：：UC-3细胞、CWR22R-V1细胞、TE-11细胞

QGY-7703细胞类似产品：：FLC7细胞、PFSK1细胞、MDCK2细胞

LS123细胞类似产品：：HS-68细胞、A-172 MG细胞、HSMC细胞

H1755细胞类似产品：：Panc_04_03细胞、ME180细胞、MDAPCa-2b细胞

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Microbiological Associates-104细胞类似产品：：HR1K细胞、KG-1a细胞、LN 382细胞

Hepatoma-22细胞类似产品：：NCI.H522细胞、Colo320细胞、B-104细胞

Rat 2细胞类似产品：：AR4IP细胞、TEV-1细胞、253J B-V细胞

Pa16C细胞类似产品：：F9细胞、Panc02-H0细胞、HO-8910 PM细胞

VM-CUB-I细胞类似产品：：SHIN-3细胞、HFL 1细胞、HOS(TE85)细胞

NCIH1963细胞类似产品：：C1498细胞、NR-8383细胞、ES2细胞

NRK49F细胞类似产品：：SN4741细胞、GM04678细胞、3T3-L1 ad细胞

H226细胞类似产品：：H-1882细胞、SK N SH细胞、CEM.C1细胞

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OCI-LY-10细胞类似产品：：Tb1Lu细胞、OAW 42细胞、Tn-5细胞

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Hs 281.T细胞类似产品：：COLO-320-DM细胞、NCM460细胞、ARH-77细胞

MIA Paca2细胞类似产品：：HUT-28细胞、rRTEC细胞、BL2141细胞

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MDA415细胞类似产品：：H2135细胞、A 375细胞、HPDLF细胞

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L-5178-Y细胞类似产品：：Clone 929细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330细胞、GM03569D细胞

Ly19细胞类似产品：：CRFK细胞、SuperTube细胞、NB9细胞

RPMI-7951细胞类似产品：：HDQP1细胞、SBC-3细胞、TC-1 [Mouse lung]细胞

CL34细胞类似产品：：HuP-T4细胞、RCCJF细胞、OCI AML3细胞

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