油红O染色试剂盒
产品编号 | 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
Oms-01 | 固定液（4%多聚甲醛） | 50 ml | -20 ℃ |
油红 O 染液（存储液） | 30 ml | RT 避光保存 |
苏木素染液（Mayer） | 50 ml | 4 ℃ 避光保存 |
说明书 | 1 份 |
一、产品简介。
油红 O 染液的主要成份 1-［2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮］-2 萘酚对脂肪具有很强的亲和性，结合细胞或组织中的脂肪后使脂滴呈现橙黄色至红色（因脂肪含量而异），随后的苏木素染液使细胞核染成蓝色，进而分析细胞或组织中脂滴的多少与分布。
二、运输与存储条件。
本产品低温运输，并按各组份保存条件分开保存，有效期 12 个月。
三、特点与优势。
1. 本试剂可以对细胞或组织中的脂肪进行染色，脂滴染色清晰。
2. 本产品为即用型试剂，操作方便，快速。
四、自备试剂与耗材。
60%异丙醇、去离子水（ddH2O）、PBS
五、使用说明。
1. 油红 O 工作液配制。计算需要的油红 O 工作液体积，将油红 O 存储液与ddH2O 按照 3:2 的比例混匀，室温静置 10 min，过滤，备用。
2. 细胞染色。
1) 细胞培养与成脂诱导。HepG2 或其它细胞传代后接种到 6 孔细胞培养板中，24 h 后细胞密度达到 70%左右，加入 1 mM 的游离脂肪酸（FFA）处理，诱导脂肪生成。
2) 成脂效果检测。成脂诱导 24 h，显微镜下观察，若细胞内出现透亮的脂滴，说明成脂诱导实验成功。
3) 固定。弃细胞培养液，PBS 洗涤 1-2 次，加入 1 ml 固定液（4%多聚甲醛）室温固定 20-30 min，弃固定液，ddH2O 洗涤 2 次。
4) 60%异丙醇润洗。加入 60%异丙醇，1 ml/孔，静置 5 min，弃异丙醇。
5) 油红 O 染色。加入油红 O 工作液，1 ml/孔，室温染色10-20 min。弃油红 O 染液，ddH2O 洗涤至无多余染液。
6) 苏木素染色。加入苏木素染液，1 ml/孔，室温染色 2-5 min，弃染液，ddH2O 洗涤至无多余染液。
7) 加入 ddH2O 或 PBS，1 ml/孔，显微镜下观察并拍照。
3. 组织切片染色。
1) 冰冻切片（8-10 μm）置于载玻片上，晾干。
2) 固定。将冰冻切片置于固定液中固定20-30 min，ddH2O 洗涤 3 次。
3) 60%异丙醇润洗。将冰冻切片置于60%异丙醇中，室温静置 5 min，捞出，稍微晾干。
4) 油红 O 染色。将冰冻切片置于油红 O 工作液中，室温染色 20-30 min。捞出，ddH2O 洗涤至无多余染液。
5) 苏木素染色。将冰冻切片置于苏木素染液中，室温静置 2-5 min，捞出，ddH2O 洗涤至无多余染液。
6) 滴加 ddH2O 或 50%甘油封片，显微镜下观察并拍照。
六、注意事项。
1. 油红 O 工作液应现用现配，不宜久放，容易失效。
2. 油红 O 工作液尽量过滤一下，以免沉淀影响实验结果。
3. 若室内温度太低，油红 O 工作液可以在 60 ℃水浴锅中孵育 10-30 min，增强染色效果。
4. 细胞和组织切片不宜用乙醇固定，影响油红 O 染色效果。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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