一、 试剂盒简介
本试剂盒是简单快速从细胞到cDNA的一步法试剂盒,无需复杂的RNA提取步骤,试剂盒中含有gDNA Remover可有效去除基因组DNA,极大降低了基因组DNA的污染。具体过程是:根据细胞数,按照80 µl /10万细胞的量加Cell Lysis Buffer,吹吸10次,充分裂解细胞;立即吸出4 - 8 µl细胞裂解产物,加入0.8 µl gDNA Remover,室温反应5 min,即可去除基因组DNA。然后加入逆转录试剂,充分混匀后,只需42℃、15 min即可得到cDNA。
二、 产品组分
Components | B0003-S (10 Rxns) | B0003-L (100 Rxns) |
Cell Lysis Buffer | 2.2 ml | 22 ml |
gDNA Remover | 10 µl | 100 µl |
4× RT Master Mix | 55 µl | 550 µl |
ddH2O | 1 ml | 2 ml |
三、 保存条件
此试剂盒建议置于-20℃冰箱中保存。
四、试剂盒特点
1、简单、快速:仅需2步、20 min即可得到cDNA。
2、基因组残留少:配有gDNA Remover,可有效去除DNA污染。
3、所需样品少:最低可提取1000个细胞。
3、 安全无毒:不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。
五、注意事项
1、本试剂盒是专为qPCR设计的,尽量不要用于基因克隆。
2、建议用24、48或96孔板培养细胞。细胞密度达到80%为。
3、细胞从培养箱中取出后建议放在室温,切勿放在冰上,以免影响细胞状态。
4、初次使用时建议对细胞进行计数,之后可参考细胞估数图进行估数。
5、Cell Lysis Buffer解冻后,需颠倒几次使之充分混匀,再放在冰上以备使用,请勿涡旋振荡。
6、本试剂盒是根据细胞来加裂解液,裂解液最少应该能够充分覆盖培养孔底部,否则过少容易导致吹出泡沫,或者裂解不充分。
7、gDNA Remover 和4× RT Master Mix在使用前都要上下颠倒混匀,短暂离心至管底。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。同时,要使用精确、量程适合的移液枪,并且不要使Tip插入液面过深,否则会因Tip壁粘着造成损失,而使酶量不足。
8、当同时需要进行数次反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
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