复合体Ⅰ(EC 1.6.5.3)又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞 的线粒体中,是线粒体内膜中的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ,同时可使 O2 还原生 成 O2-,是呼吸电子传递链上产生 O2-的主要部位。测定该酶活性,不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态, 而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。 复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前取一支加入 1 mL 丙酮,充分溶解,2-8℃可保存 1 个月(1 瓶粉剂即可做 100T,为延长 试剂盒使用时间,故此产品多给一支);
2、 试剂三:临用前加入 0.1mL 丙酮,丙酮易挥发,使用完毕后注意封口,-20℃可保存 2 个月;
3、 试剂三工作液:临用前根据用量将试剂三:丙酮=5μL:0.5mL(约 50T)混合备用,现用现配;
4、 试剂四:临用前取一支加入 1.6mL 蒸馏水(约 100T),充分溶解,-20℃可保存 1 个月,避免反复冻融(1 瓶粉剂即可做 100T,为延长试剂盒使用时间,故此产品多给一支);
5、 工作液的配制:根据用量将丙酮:试剂二:试剂三工作液=250μL:250μL:500μL(约 50T)混合备用, 现配现用。
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索莱宝龚思雨