限制性内切酶，也称为限制性核酸内切酶或限制酶，是一类能够识别并附着在特定的核苷酸序列上的酶。它们能够催化DNA分子中的磷酸二酯键的水解，从而在DNA链的特定部位进行切割。这种特性使得限制性内切酶在基因工程、DNA克隆和DNA图谱绘制等领域具有广泛的应用。
根据限制酶的结构、辅因子的需求以及作用方式，可以将它们分为三种主要类型：一型（Type I）、二型（Type II）和三型（Type III）。
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