苹果酸合酶(MS)活性测定试剂盒-可见显色法微板法/48样
产品简介:
苹果酸合酶(MS, EC 2.3.3.9)是乙醛酸循环的关键酶之一,在细菌、真菌、原生动物以及萌发的植物种子中均有发现。
苹果酸合酶(MS)催化乙酰 CoA 和乙醛酸生成苹果酸和 CoA,生成的 CoA 具有还原性并可与 DTNB 作用生成黄色物质,该有色物质在 412nm 处有特征吸收峰,即可得出 MS 酶活性大小。
反应式:acetyl-CoA+glyoxylate+H2O=(S)-malate+CoA
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 提取液 60mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 液体 20mL×1 瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部,再加 3.2mL蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 粉剂 mg×1 支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加 1.1mL 蒸馏水,混匀溶解备用。 |
试剂三 | 粉体 mg×1 支 | -20℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部,再加 0.55mL蒸馏水,混匀溶解备用。 |
试剂四 | 液体 4mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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试剂五 | A:粉体 mg×1 瓶 B:液体 2mL×1 瓶 | 4℃保存 | 临用前向 A中加 1.8mL的 B液,加23.2mL 的蒸馏水,混匀溶解备用。 |
标准品 | 粉体 mg×1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂 |
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
磷酸转乙酰酶(PTA)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。 12000rpm 4℃离心 15min,取上清,置冰上待测。
[注]:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例提取
②细胞样本:
先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细胞加入 1mL 提取液;超声波破碎细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);4ºC 约 12,000rpm离心 10min,取上清作为待测样品。
[注]:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
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