胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶(ctGPD)活性试剂盒微板法/96样
产品简介:
胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶(ctGPD,EC 1.1.1.8)的酶活水平直接决定了葡萄糖分解代谢过程中向甘油合成方向的物质流分配量,也因此决定甘油的生成水平。ctGPD 为 NAD 依赖型,催化磷酸二羟丙酮生成 3-磷酸甘油。通过 340nm 下测定 NADH的下降量,进而得出 ctGPD 的酶活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体100mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂 mg×3 支 | -20℃保存 | 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,每支分别加 0.44mL 蒸馏水溶解备用。用不完的试剂-20℃保存,禁止反复冻融,三天内用完。 |
试剂二 | 液体 17mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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试剂三 | 粉剂 mg×1 支 | 4℃保存 | 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,加1.1mL 蒸馏水充分溶解。 |
所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔板、可调试移液器、台式离心机、水浴锅、研钵、冰和蒸馏水。
胞浆-3-磷酸甘油脱氢酶(ctGPD)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
① 组织样本:
取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.5g)到研钵内,加入 1mL 提取液,在冰上进行冰浴匀浆或者液氮研磨。 12000rpm ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1 :5~10 的比例提取。
② 细菌/真菌样本:
先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌/真菌加入1mL 提取液;冰
浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
12000rpm, 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
[注]:也可按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000 :1 的比例
进行提取。
③ 液体样本:澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清液检测。
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