植物花色苷测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
花色苷是一类易溶于极性溶剂的天然色素,属黄酮类化合物。花色苷广泛存在于植物的根、茎、叶、花和果实中,使其呈现由红到紫等不同颜色,是植物主要的呈色物质。
测定原理:
采用 pH 示差法测定花色苷含量,当 pH 为 1.0 时花色苷在 530nm 处有最大吸收峰,而当 pH 为 4.5 时,花色苷转变为无色查尔酮形式, 在 530 处无吸收峰, 利用此特性分别测定在不同 pH 下的 530nm 和700nm 处的吸光度值。pH 示差法减少了溶液 pH 和溶剂差异的影响,排除了其他非花色苷类物质对检测结果的干扰。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、超声波清洗器、研钵和蒸馏水。
测定步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上;试剂一和试剂二 25℃(室温)预热 10min 以上。
2、取 100 µL 上清液和 900 µL 试剂一(相当于稀释 10 倍),40℃水浴 20min,分别测定 530nm和 700nm 处的吸光值,分别记为 A1 和 A2。
3 、 取 100 µL 上清液和 900 µL 试剂二(相当于稀释 10 倍),40℃水浴 20min,分别测定 530nm和 700nm 处的吸光值,分别记为 A3 和 A4 。4 、 计算△A=(A1-A2)-(A3-A4)。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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