His标签蛋白纯化试剂盒

品名：Super-His™ His 蛋白纯化 Kit，货号：P3406，品牌：Engibody

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)

保姆级His蛋白纯化试剂盒

Super-His™ His 标签蛋白纯化试剂盒的优势
 
1、本试剂盒中包含特殊配方的雷霆细菌裂解液，可快速裂解大肠杆菌并完全释放可溶型his标签蛋白及包涵体（无需超声破菌，无需加热，快速温和，完全裂解。盒内裂解液5-10分钟内即可高效裂菌并完全释放his标签融合蛋白）。
 
2、本试剂盒可以纯化可溶性蛋白，也可以纯化包涵体蛋白，可以纯化大肠杆菌胞内表达蛋白，也可以纯化来自酵母、昆虫及哺乳动物细胞的分泌性蛋白。
 
3、试剂盒中的镍离子填料可以重复使用10次以上。
 
4、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂，高效细菌裂解液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、镍离子填料、重力空柱（带控流阀）以及下游WB检测所需的高特异性his小鼠单抗。

让His蛋白纯化变得简单高效！

第一部分：背景简介及应用场景
 
His标签是由6个组氨酸首尾相连组成的短肽，通常连接在蛋白质的N端或C端，能够用于重组蛋白的分离纯化。由于His标签分子量小，其对重组蛋白的结构及生物活性几乎没有影响。His抗体能够特异性识别His标签，可以用于定性定量检测His融合蛋白的表达、细胞内定位等。
 
那么his标签是如何加在重组蛋白的N端或者C端呢？
 
一般在商业化的原核表达载体（最经典的是pET-28a (+)细菌表达载体）骨架上已经包含6个组氨酸对应的碱基序列，可以通过多酶切位点插入目的蛋白的基因，然后构建带有His标签的重组表达质粒。如果所用载体上没有6个组氨酸对应的碱基序列，可以人为加入，在基因合成目的蛋白的基因序列的时候，在其一端再加上18个碱基（6个组氨酸的碱基序列）即可。
 
His 标签纯化蛋白的优点
1）、His-Tag非常小，对蛋白的下游应用无影响，且不会因为his-tag形成二聚体，纯化后一般无需切除his-tag。
 
2）、N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达。
 
3）、采用IMAC（固定化金属离子亲和层析）纯化His-Tag融合蛋白，成本低，载量大。
 
4）、His-Tag的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体。
 
5）、与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统。
 
His标签纯化蛋白的缺点
1）、不能屏蔽毒性蛋白。
 
2）、镍离子纯化填料对目的蛋白的结合特异性没有GST标签蛋白纯化那么高。
 
3）、易形成包涵体蛋白。
 
 
第二部分：技术原理
His-Tag蛋白纯化原理主要基于组氨酸（His）残基上的咪唑基团和金属离子如Ni2+、Co2+等的特异性结合。
 
这种结合作用使得His-Tag蛋白能够选择性地结合到这些金属离子上，而其他杂质蛋白则难以与之结合。利用这种特性，可以将His-Tag蛋白结合到装有金属离子的层析介质上，如镍离子凝胶填料。在纯化过程中，可以通过改变缓冲液中的咪唑浓度来竞争性地洗脱结合在介质上的His-Tag蛋白，从而实现高纯度分离。
 
这种蛋白纯化的方法称之为IMAC（固定化金属离子亲和层析）
 
Ni2+在亲和纯化实验中的使用最为广泛。根据结合基团的不同，Ni2+亲和层析柱可分为Ni-IDA和Ni-NTA。NTA的颗粒粒度均匀，粒径更小，并且螯合镍更稳定，能耐受较高的还原剂，使填料更加稳定，镍离子不易脱落，因此选择Ni-NTA亲和层析柱进行蛋白纯化。
 
Co2+的载量会低于Ni2+，但特异性要比Ni2+好很多。



第三部分：技术流程


 

订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)