几丁质酶(Chitinase)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌 类的细胞壁中。而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害 的研究热点。
测定原理:
几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在 585nm 处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备仪器和用品:
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计、1 ml 玻璃比色皿,蒸馏水。
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积( ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1 ml 提 取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上待测。
2. 真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液体积( ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1 ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃, 离心 20min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
伊势久(江苏连云港)生物科技有限责任公司
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