土壤硝态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。
测定原理：
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。
试剂组成和配制：
产品名称 | SSQ059-100T/96S | Storage |
试剂一：粉剂 | 2支 | 4℃避光 |
试剂二：液体 | 50ml | 4℃ |
说明书 | 一份 |
试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加1ml浓硫酸充分溶解。
自备仪器和用品：
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
样本处理：
按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g新鲜土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，25℃，10000g离心10min，取上清待测。
测定操作表：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。
2、操作表（于EP管中加入下列试剂）：
| 空白管 | 测定管 |
样本（μl） |
| 10 |
蒸馏水（μl） | 10 |
|
试剂一（μl） | 20 | 20 |
充分混匀，25℃静置30min |
试剂二（μl） | 475 | 475 |
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，转移200uL至微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管。 |
计算公式：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0151x + 0.0054，R2= 0.9995
NO3—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0054）÷ 0.0151÷（W÷V样总）= 66.23×（△A-0.0054）÷W
V样总：加入提取液体积，1ml；W：样本质量，g。
用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0085x + 0.0004，R2= 0.9998
NO3—— N（mg/kg鲜重）=（△A-0.0004）÷ 0.0085÷（W÷V样总）=117.65×（△A-0.0004）÷W
V样总：加入提取液体积，1ml；W：样本质量，g。
注意事项：
硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度一致。
土壤经风干或者烘干很容易引起NO3—— N的变化，所以最好采用新鲜土壤进行测定，以准确反映该指标含量。
试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
最低检出限为100μg/kg。
若△A过高，建议将待测样本使用蒸馏水适当稀释后再进行测定，计算时乘以相应的稀释倍数；若△A过低，建议适当增加样本量后再进行测定，计算时修改相应的样本量。
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