兔结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒

检测方法：双抗体夹心ELISA法

预期用途：定量检测兔血清、血浆或细胞培养上清液等样本中的CTGF浓度，仅供科研使用。

实验原理

采用高纯度抗兔CTGF抗体包被微孔板，样本中的CTGF与固相抗体结合后，依次加入生物素标记的检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，形成复合物。洗涤后加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色产物，终止后转为黄色。450 nm波长下测定吸光度（OD值），CTGF浓度与OD值呈正相关，通过标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 预包被酶标板 | 96孔（可拆卸） | 2-8℃干燥保存 |

| CTGF标准品（冻干） | 2瓶（4,000 pg/mL）| -20℃保存 |

| 样本稀释液 | 15 mL | 2-8℃保存 |

| 生物素化抗体 | 1.5 mL | -20℃避光保存 |

| HRP-链霉亲和素 | 1.5 mL | -20℃避光保存 |

| TMB显色液（A/B） | 各6 mL | 2-8℃避光保存 |

| 终止液 | 6 mL（1M H₂SO₄） | 2-8℃保存 |

| 20×浓缩洗涤液 | 25 mL | 室温保存 |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除沉淀，稀释后检测。

操作步骤

标准品配制：用样本稀释液复溶冻干标准品至1,000 pg/mL，依次倍比稀释为500、250、125、62.5、31.25、15.625 pg/mL，空白孔为0 pg/mL。

加样：标准品/样本各加50 μL至对应孔，37℃孵育30分钟。

洗涤：弃液后每孔加300 μL洗涤液，重复5次。

检测抗体：每孔加50 μL生物素化抗体，37℃孵育30分钟，洗涤。

酶结合物：每孔加50 μL HRP-链霉亲和素，37℃避光孵育15分钟，洗涤。

显色：加TMB A/B液各50 μL，37℃避光显色10分钟。

终止与检测：加50 μL终止液，450 nm波长读取OD值（630 nm校正）。

计算与分析

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制标准曲线（四参数拟合）。

样本浓度通过曲线方程计算，稀释样本需乘以稀释倍数。

性能参数

检测范围：15.625-1,000 pg/mL

灵敏度：<10 pg/mL

批内变异：CV <8%

批间变异：CV <12%

注意事项

试剂使用前需平衡至室温，避免交叉污染。

终止液为强酸，需谨慎操作。

超出检测范围的样本需稀释后重测。

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