产品名称 | 人趋化因子CCL3样蛋白1(CCL3L1)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human CCL3L1 ELISA Kit |
分类 | Human/人Elisa试剂盒 | 检测范围 | 0.3125ng/mL-10ng/mL |
灵敏度 | 0.15625ng/mL | 货号 | PH33193 |
检测方法:竞争法酶联免疫吸附试验(ELISA)
规格:96T/48T
检测范围:78.125–5000 pg/mL
最低检测限:32 pg/mL
适用样本:血清、血浆、组织匀浆、腹水、细胞培养上清
保存条件:2–8℃冷藏,避免光照或冷冻。
实验原理
试剂盒采用竞争法检测样本中CCL3L1含量。预包被抗体与样本中的CCL3L1及生物素标记抗原竞争结合,形成固相免疫复合物。洗涤后加入亲和素-HRP,催化TMB显色,450 nm波长下测定吸光度(OD值),OD值与样本中CCL3L1浓度呈负相关。

操作步骤
试剂准备
所有试剂使用前需平衡至室温(20–25℃),避免反复冻融。
配制洗涤液:使用干净塑料容器,按说明书比例稀释浓缩洗涤液。
加样与孵育
标准品孔:加入50 μL系列浓度标准品(建议梯度稀释)。
样本孔:加入50 μL待测样本(血清/血浆需离心去除杂质)。
每孔加入50 μL生物素标记抗原,37℃孵育30分钟。
洗涤
弃去液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后拍干,重复3次。
酶结合反应
每孔加入100 μL亲和素-HRP,37℃孵育30分钟,再次洗涤。
显色与终止
每孔加入90 μL TMB底物(避光操作),37℃避光显色15分钟。
加入50 μL终止液(2M硫酸),立即测定OD值(450 nm)。
注意事项
样本处理:避免溶血或反复冻融;组织样本需匀浆后离心取上清。
板条保存:未使用的板条需密封放回4℃保存,避免受潮。
加样精度:使用一次性吸头,避免交叉污染;加样时避免触碰孔壁。
显色控制:底物A需避免挥发,底物B需避光;终止后10分钟内完成读数。
质控要求:建议每板设置复孔及空白对照,CV值应≤15%。
结果计算
以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线,通过四参数拟合方程计算样本浓度。
性能参数
精密度:板内变异系数<10%,板间变异系数<12%。
回收率:85–115%(添加标准品验证)。
特异性:不与CCL3、CCL4等其他趋化因子交叉反应。
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