超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)试剂盒说明书(NBT法)
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
SOD(EC 1.15.1.1)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化超氧化物阴离子发生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系统中具有重要作用。
测定原理:
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.),O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜,后者在560 nm处有吸收;SOD可清除O2-.,从而抑制了甲臜的形成;反应液蓝色越深,说明SOD活性愈低,反之活性越高。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备:
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1 mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200 W,超声3 s,间隔10 s,重复30次);8000 g,4 ℃离心10 min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液),进行冰浴匀浆。8000 g,4 ℃离心10 min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
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