乙醇含量测定试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
乙醇俗称酒精,是最常见的一元醇,在检测酒的质量、分析血液乙醇含量和果蔬品质判断中通常需要频繁、大量地检测乙醇含量。
1.乙醇是酒的主要成分,是衡量酒质量的重要指标之一。我国是世界上最早发明酿酒的国家,也是酒类产品消费大国,其消费量居世界之首。因此,快速、准确测定酒中乙醇含量,对于确保酒的质量和保护消费者的健康具有重大意义。
2.乙醇是中枢神经系统最基本的抑制物,如果乙醇被大量摄入,会不可逆抑制呼吸甚至导致死亡,血液中乙醇检测结果通常作为认定是否酒后驾驶或醉酒驾驶的依据。
3.乙醇是判断储藏过程中果蔬品质变化的重要指标,研究表明,适当的乙醇处理能够减少腐烂和减轻果蔬生理病害、延缓果蔬成熟和衰老进程,从而延长货架寿命。因此,简便、准确和快速测定果蔬中乙醇含量具有非常重要的意义。
测定原理:
乙醇在乙醇脱氢酶的催化下氧化脱氢生成乙醛,同时,NAD被还原生成NADH,NADH在1-mPMS的作用下使WST-8显橙黄色,通过450 nm下测定吸光值变化可测得乙醇含量。
试剂一:用前加12ml蒸馏水混匀,如一次用不完可根据需求量按照试剂一:蒸馏水=1:1200进行稀释; 试剂二:粉剂×1瓶, -20℃保存;临用前加入6 ml试剂三充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;
自备仪器和用品:
酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
乙醇提取:
组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml蒸馏水),进行匀浆,8000g,25℃离心10min,取上清待测。
细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml蒸馏水),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次), 8000g,25℃离心10min,取上清待测。
血清(浆)等液体样品:直接测定。
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