FITC-尿素酶/FITC-Urease/异硫氰酸荧光素-脲酶(Fluorescein Isothiocyanate-Urease)/FITC-Ure / Ure-FITC/绿色荧光标记水解酶探针
组成单元:尿素酶作为活性核心,负责催化尿素水解;FITC 作为荧光标记基团,提供可检测的荧光信号,二者通过尿素酶分子中的氨基(-NH₂)与 FITC 的异硫氰酸酯基(-NCS)发生亲核反应实现连接;
物理状态:常规为淡黄色至黄色粉末或冻干品,易吸潮,科研级产品纯度通常≥90%(以蛋白质含量计),且需保证酶活性(通常≥5000 U/mg 蛋白);
分子量:因尿素酶来源不同存在差异(如刀豆来源尿素酶为同源六聚体,分子量约 480 kDa),标记 FITC 后分子量会略有增加,具体取决于标记率(通常每个酶分子可结合 5-20 个 FITC 分子)。
酶活性保留:优质的 FITC - 尿素酶需保留尿素酶的核心催化活性,其催化反应为:尿素 + H₂O → 2NH₃ + CO₂,反应最适 pH 通常为 7.0-8.0(不同来源略有差异),最适温度为 37-45℃,金属离子(如 Ag⁺、Hg²⁺)会强烈抑制酶活性,而一些螯合剂(如 EDTA)对活性影响较小;
特异性:对尿素具有高度底物特异性,不催化其他酰胺类化合物水解,这一特性使其在尿素检测相关应用中具备高准确性;
溶解性:易溶于水、生理盐水及 pH 6.0-8.0 的缓冲液(如 PBS、Tris-HCl 缓冲液),不溶于有机溶剂(如乙醇、丙酮),溶解后溶液澄清,无明显沉淀。
储存稳定性:冻干品在 - 20℃避光、密封条件下可稳定保存 12-24 个月;溶解后需现配现用,若短期(1-2 天)使用,可在 4℃避光条件下保存,但酶活性会有轻微下降(通常下降≤10%),反复冻融会导致酶活性显著丧失(下降≥50%);
环境稳定性:强光(尤其是紫外光)会导致 FITC 荧光淬灭,高温(>50℃)、极端 pH(pH<4.0 或 pH>10.0)会使酶蛋白变性,进而同时丧失荧光信号与酶活性,需严格控制使用与储存环境。
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