脯氨酸脱氢酶( Proline dehydrogenase,ProDH)试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质,在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸,降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。
测定原理:
利用异硫氰酸甲酯检测ProDH催化的脱氢反应,600nm处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。
试剂三临用前加入4ml蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四临用前加入4ml蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆,1500g 4℃离心15min,取上清液于一支新的EP管中,加入一滴试剂一(用10μl的枪头加入),涡旋混匀,冰浴放置30min后,16000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。
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