鸟氨酸转氨酶(δ-OAT)试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
脯氨酸是植物体内适应逆境胁迫的一种重要的渗透调节物质。高等植物中脯氨酸代谢因其初始底物不同,分为谷氨酸( Glu) 和鸟氨酸( Orn) 两条合成途径。鸟氨酸转氨酶( δ-OAT) 是 是以鸟氨酸为前体合成脯氨酸途径的关键酶,对植物适应逆境胁迫起关键作用。
测定原理:
鸟氨酸和α-酮戊二酸在鸟氨酸转氨酶和NADH作用下发生氨基转移反应生成吡咯啉-5-羧酸(P5C),同时产生NAD,通过检测340nm处的吸光度的变化可反映出鸟氨酸转氨酶活性的高低。
自备仪器和用品:
天平、低温离心机、研钵、紫外可见分光光度计、1ml石英比色皿。
酶液提取:
1、组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。
2、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置冰上待测。
3、液体:直接检测。
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