谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量测定试剂盒说明书
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。
测定原理:
利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在570nm下进行测定。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
谷氨酸提取:
1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(ml):试剂一体积(ml)为1:5~10的比例(建议取0.1ml血清(浆)或者细胞培养液加入1ml试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心10min,取上清,置冰上待测。
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