类黄酮糖基转移酶(UFGT)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
类黄酮是植物次生代谢产物,糖基化是类黄酮基本结构形成的最主要的修饰反应之一,提高了类黄酮苷元的化学稳定性,这一过程主要由类黄酮糖基转移酶催化的,使类黄酮-OH 与 UDPG 反应,是黄酮合成途径中的关键酶。
测定原理:
类黄酮糖基转移酶催化花青素与尿苷二磷酸葡萄糖反应产生花青苷,主要以矢车菊素 3-葡萄糖苷(C3G)形式存在,用 HPLC 检测产物可反映类黄酮糖基转移酶的酶活性。
自备仪器和用品:
天平、研砵、离心机、恒温水浴锅、100 目筛、高校液相色谱、针头过滤器(水系、0.22μm)、滤膜(水系、0.45 μm)、耐水 C18 柱(4.6×250mm)、样品瓶、甲酸、甲醇(色谱级)、超纯水实验前的准备工作
检测产物制备
对照管
测定管
样本(μL)
100
试剂二(μL)
试剂一 (μL)
150
充分混匀,30℃反应 30min
充分混匀,10000g ,4℃, 离心 10min ,取上清过 0.45 μm 水系滤头,待检测。
注 意:
1、流速由小到大调节,避免柱压过大。
2、使用完毕时,先用 50%的甲醇水溶液洗色谱柱45min ,再用纯甲醇冲洗色谱柱 30min。
3、标准品的稀释倍数要根据样品中 C3G 浓度确定,样品中 C3G 的峰面积必须落在不同浓度的 C3G 标准品的峰面积之内,该标准品稀释倍数只是一个参考。
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