总氨基酸(T-AA)测定试剂盒/比色法/78样
测定原理:
铜离子(Cu2+)能与各种氨基酸络合产生蓝绿色络合物,在一定波长下颜色的深浅与总氨基酸的含量成正比,故可以用可见光分光光度计测其吸光度,通过换算得到总氨基酸含量。试剂的组成与配制:
试剂一:粉剂× 1 支,4℃保存 6 个月。
试剂二:液体 5ml ×1 瓶,4℃保存 6 个月。氨基酸反应液的配制:将试剂一加双蒸水至 160ml,充分混匀成蓝色混悬液,再缓慢滴加试剂二,边滴边搅至混悬液全部转换成淡蓝色透明溶液为止,4℃保存(粉剂较难溶解,试剂二滴加完后还需室温搅拌混匀半小时以上才能溶解完全)。
试剂三:粉剂×1 支,4℃保存 6 个月。氨基酸显色剂配制:将试剂三加水至 80ml 充分混匀。(注意:有腐蚀性,配制时勿碰皮肤。)
试剂四:甘氨酸标准品 75.07mg/支×6 支,4℃保存 6 个月。50mmol/L 甘氨酸标准溶液的配制:将 75.07mg的甘氨酸标准品溶于 20ml 双蒸水中,充分混匀,现用现配。
试剂五:液体 100ml ×1 瓶,4℃保存 6 个月。操作表:
空白管
标准管
测定管
双蒸水(ml)
1
50μmol/ml氨基酸标准液(ml)
尿液(ml)
氨基酸反应液(ml)
2
混匀,3500 转/分离心 10 分钟,取上清液于 650nm 处,1 ㎝光径,双蒸水调零比色
样本前处理:准确称取组织重量,按重量体积比加入 9 倍生理盐水,制成 10%匀浆,3500 转/分离心 10 分钟,取上清待测。同时取 10%匀浆上清进行蛋白测定。
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