总抗氧化能力(T-AOC)检测定试剂盒A(BTS法)/微板法/96样
试剂组成和配制:
试剂组成
试剂名称
96T
保存条件
试剂一
检测缓冲液
20ml ×1 瓶
-20℃保存
试剂二
ABTS 溶液
1ml ×1 支
-20℃,避光保存
试剂三
过氧化物溶液
0.5ml ×1 支
试剂三应用液配制:临用前按照 1:39 的比例用双蒸水(40 倍)稀释成应用液,现用现配
ABTS 工作液配制:按照试剂一:试剂二:试剂三应用液=76:5:4 的比例配置成 ABTS 工作液,用多少配多少,室温避光保存,30 分钟内使用完
试剂四
试剂四应用液配制:临用前按过氧化物酶:试剂一 = 1:9 的比例(即
倍)配成试剂四应用液,现用现配
试剂五
10mM Trolox 溶液
0.1ml ×1 支
试剂盒附送 96 孔酶标板一块
预期用途用于血清、血浆、组织匀浆、细胞(或细胞上清)等中总抗氧化能力测定。
测定原理ABTS 在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的 ABTS ·+,在抗氧化物存在时,ABTS ·+ 的产生会被抑制,在405nm 或 734nm 测定 ABTS ·+ 的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。 Trolox 是一种 VE 的类似物,具有和 VE 相近的抗氧化能力,用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如,Trolox 的总抗氧化能力为 1,相同浓度情况下,其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和 Trolox 相比的倍数来表示。适用仪器各种类型的酶标仪或者可以测定微量样本的分光光度计。样本前处理血清(浆)、唾液、尿液、细胞上清等液体样本的制备:血液样本采集后需及时分离血清或血浆,避免溶血,唾液、尿液、细胞上清等直接取样进行测定。血浆建
议肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜采用 EDTA。组织样本:准确称取组织重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物, 4℃, 12000 转/分,离心 5分钟,取上清测定。
细胞样本收集不少于 100 万细胞(建议细胞刮处理,不宜使用胰酶和 EDTA 消化),加入 200 μl 冰冷的 PBS,匀浆或超声以充分破碎细胞并释放其中的抗氧化物,4℃, 12000 转/分,离心 5 分钟,取上清测定。
注: 组织或细胞样本制成匀浆后需要测定其蛋白浓度,可以用我所 A045-2 考马斯亮蓝法蛋白定量测试盒或者 A045-3 的 BCA 法蛋白定量试剂盒测得.操作步骤
空白孔
标准孔
测定孔
蒸馏水(ul)
10
不同浓度的 MTrolox
溶液(ul)
待测样本(ul)
试剂四应用液(ul)
20
ABTS 工作液(ul)
170
室温反应 6min,波长 405nm(或在 405-425nm 内选),酶标仪读取各孔 OD 值
注:反应完后尽快读数,标准品 Trolox 溶液建议用蒸馏水稀释成 0.1 、0.2 、0.4 、0.8 、1.0mM
上海酶联生物科技有限公司
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