人肝癌细胞带绿色荧光；HepG2/GFP

                                                           人肝癌细胞带绿色荧光；HepG2/GFP
产品信息：

HepG2/GFP细胞是一种携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的人肝癌细胞系，源自原始的HepG2细胞系。该细胞系通过稳定整合GFP基因，能够在荧光显微镜下发出绿色荧光，便于实时监测细胞位置、迁移和动态变化。以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞特性

来源：HepG2/GFP细胞是从人肝癌组织中分离得到的HepG2细胞系衍生而来，属于肝细胞癌模型。

绿色荧光蛋白标记：该细胞系稳定表达了绿色荧光蛋白（GFP），在荧光显微镜下可发出绿色荧光，适用于实时监测细胞位置、迁移和动态变化。

形态：上皮细胞样，贴壁生长。

应用：广泛用于肝癌研究，包括细胞迁移、侵袭、药物筛选及基因表达研究等。

2. 培养操作

2.1. 培养基

使用MEM（Minimum Essential Medium）培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素溶液（双抗）。

2.2. 培养条件

温度：37°C。

气体环境：95%空气 + 5% CO。

湿度：饱和湿度。

2.3. 传代步骤

观察细胞密度：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。

去除旧培养基：轻轻吸去培养瓶中的旧培养基。

清洗细胞：用预热的PBS轻轻清洗细胞1-2次。

消化细胞：加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，置于37°C培养箱中消化1-3分钟，显微镜下观察细胞消化情况。

终止消化：加入适量含血清的新培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落并均匀悬浮。

分装细胞：将细胞悬液按1:2至1:4的比例分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

继续培养：将培养瓶放回培养箱中继续培养。

2.4. 冻存与复苏

冻存：使用含有90%胎牛血清和10%DMSO的冻存液，将细胞悬液分装到冻存管中，按照标准冻存程序逐步降温后存放在液氮罐中。

复苏：从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中摇晃解冻，然后将细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中，离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，接种到培养瓶中继续培养。

3. 注意事项

荧光监测：在荧光显微镜下观察GFP荧光时，需使用合适的激发光（通常为488 nm）和发射滤光片，以避免背景荧光干扰。

细胞状态监控：定期观察细胞形态和生长状态，确保无污染，并根据实验需求调整传代比例和培养条件。

细胞类型与特性：

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。

特殊细胞的生物特性举例：

成纤维细胞：具丰富粗面内质网、高尔基体，能合成胶原纤维、弹性纤维及有机基质；在外伤刺激下可恢复幼稚状态，参与组织修复。

肿瘤细胞：具无限增殖、贴壁依赖或悬浮生长、易转化等特性，常用于药物筛选与癌变机制研究。

神经干细胞：具多向分化潜能（可分化为神经元、星形胶质细胞等），增殖能力强，在体外培养中可形成克隆球。

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注意事项与应用：

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。